nmdar1在创伤性脑水肿中的作用机制及其与水通道蛋白-4相关性的研究

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1、NMDARl在创伤性脑水肿中的作用机制及其与水通道蛋白．4相关性的研究计：学位论文：40页表格：6个插图：15幅郭兆慧指导教师：韩杰教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：神经病学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明＼啪Y呲2眦2帆8眦帆3㈣190＼II＼本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

2、或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：塑堑鳌签字日期：卫年土月旦日目录——、摘要-·············································································1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、

3、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)削面⋯一一””一“一一”一一”⋯”一一“一””一”．．一””一“”一”“·6(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IOPOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28三、

4、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37四、致谢·“·”······························-······································40NMDARl在创伤性脑水肿中的作用机制及其与水通道蛋白．4相关性的研究硕士生姓名：指导教师：指导小组：专业名称：郭兆慧韩杰教授王哲教授神经病学摘要目的：探讨NMDA受体和水

5、通道蛋白．4在创伤性脑水肿发生与发展的过程中之间的关系以及创伤性脑损伤后NMDAR激活与否对AQP4的影响和AQP4对NMDARl的影响。方法：采用自制改良型Feeney’s自由落体脑创伤装置(冲击力：600gxcm)，建立局灶性中度脑创伤模型。实验分为野生型AQP4组和AQP4敲降组。(一)野生型AQP4组(n=60)，将60只雄性SD大鼠随机分为五组，假手术组、致伤组、生理盐水组(致伤+生理盐水干预)、MK．801组(致伤+MK．801干预)、NMDA组(致伤+NMDA干预)，每组各12只(n=1

6、2)。假手术组，仅切开头皮和颅骨开窗，不致脑损伤；致伤组，致伤后不给予干预；生理盐水组，致伤后20分钟腹腔内注射0．9％生理盐水(1ml／Kg)；MK一801组，致伤后20分钟腹腔内注射NMDA受体拮抗剂MK-801(1mg／kg)；NMDA组，致伤后60分钟腹腔内注射NMDA受体激动剂NMDA(20mg／kg)。致伤后24小时取材。应用WestemBlot法检测AQP4的蛋白在创伤性脑水肿中的整体表达变化；免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察AQP4在创伤性脑水肿中的区域表达变化。(二)AQP4敲降组

7、(n=72)，随机选取72只雄性SD大鼠，经过RNA干扰技术后，分为六个亚组：生理盐水对照组、GFP对照组、LVI组、LV2组、LV3组、LV4组，每组各12只(n=12)。生理盐水对照组，使用微量注射器局部脑皮质内注射O．9％生理盐水309l；其他各组分别注射等计量GFP、LVI、LV2、LV3、LV4干扰剂。RNA干扰剂干扰后48小时，制作脑创伤模型，致伤后24小时取损伤灶区脑组织。应用实时定量PCR(Real-timePCR)、WesternBlot法检测AQP4基因敲降效果，及NMDARl的基

8、因表达水平的变化。结果：(一)AQP4在NMDA受体拮抗剂MK．801干预后，损伤区的整体表达变化结果：给予NMDA受体拈抗剂MK．801之后，AQP4的蛋白表达水平会明显下降，(P<0．05)；(二)AQP4在NMDA受体拮抗剂MK．801和激动剂NMDA干预后，损伤区的区域表达变化结果：1、海马CAl、CA2、CA3区AQP4免疫组化染色阳性信号的面积百分比：脑创伤后，致伤组与假手术组CAl区、CA2区、CA3区AQP4的免疫阳性信号比较，MK一80