nestin阳性小鼠神经系统肿瘤模型的建立及病理学观察

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文Nestin阳性小鼠神经系统肿瘤模型的建立及病理学观察Establishmentandpathologicalobservationofnervoussystemtumormodelfornestin—positivereportermouse课题来源：国家自然科学基金(30971361，81090422，810010)专业名称病理学与病理生理学学位申请人肖政权指导教师李建明教授答辩委员会主席丁彦青教授答辩委员会成员张雅洁教授钟雪云教授论文评阅人张文清教授钟雪云教授2012年月日广州硕：J：

2、学位论文Nestin阳性小鼠神经系统肿瘤模型的建立及病理学观察硕士研究生：肖政权指导教师：李建明教授摘要研究背景和研究目地人原发性中枢神经系统肿瘤发病率约2～5／10)j-；并且这些肿瘤中，85％为颅内肿瘤，15％为椎管内肿瘤。颅内肿瘤以胶质瘤最为多见(约占40％)，其次为脑膜瘤(13％～19％)，听神经瘤(神经鞘瘤)(8％～9％)。胶质瘤中，恶性星形胶质细胞瘤(胶质母细胞瘤)占50％～60％，良性星形胶质细胞瘤约占25％一-30％。儿章的颅内肿瘤发病率甚高，仅次于白血病而占d,JL恶性肿瘤的第2位；儿章颅内肿瘤除胶质瘤外，

3、髓母细胞瘤最常见。神经系统肿瘤的主要症状：①肿瘤压迫或破坏周围脑组织所引起的局部神经症状，如癫痫、瘫痪、视野缺损等。②颅内占位病变引起颅内压增高的症状，表现为头痛、呕吐、视神经乳头水肿等。nestin是一种中问丝类型的蛋白，能够特异性的表达在神经上皮干细胞上，为神经干细胞的特征性标志物之一。nestin．GFP转基因报告小鼠是一种最常用的研究神经干细胞的一种工具鼠，该GFP基因插入在nestin启动子下游，受nestin基因的调控，应用nestin．GFP转基因报告小鼠可以标记和示踪神经干细胞的分化和迁移。目前对于神经系统肿

4、瘤的研究已经有了很大的进展，但是对于神经系统肿瘤的早期细胞起源和分子发生机制并不明确。大部分神经系统肿瘤在早期由于不能被及时发现，很难获得肿瘤早期的标本。当患者出现较明显的临床症状时，摘要疾病大都已经发展到中晚期阶段，此时的细胞类型和分子标记已经发生了较大的变化，因此其相应研究只是一种回顾性研究，并不能如实反映神经系统肿瘤的早期变化。Nestin阳性报告小鼠神经系统肿瘤模型的建立将为研究神经系统肿瘤的早期细胞起源和分子发生机制提供重要的工具，其可能的应用如下：(1)揭示神经系统肿瘤的早期细胞起源及分子发生机制：(2)利用脑内

5、神经干细胞位置的相对局限性和与神经系统肿瘤存在的异位性来研究神经系统肿瘤干细胞的来源，阐明神经系统肿瘤发生的可能机制；(3)研究神经系统肿瘤干细胞的来源和神经系统肿瘤的转化靶点不仅对神经系统肿瘤的发病机制具有重要意义，而且对神经系统肿瘤的治疗策略刃i具有指导意义，即室管膜下层残存的肿瘤干细胞是新的治疗靶点；(4)研究室管膜下层肿瘤干细胞远处迁移能力，探索神经系统肿瘤的转移机制。我们的研究包含以下几个部分：首先我们对nestin．GFP转基因报告小鼠的特征进行了形态学观察；在此基础上，我们应用ENU化学诱导nestin—GFP

6、转基因报告小鼠，试图建立nestin阳性报告小鼠神经系统肿瘤模型，并对其进行形态学的观察；最后，我们探讨其他方式建立nestin阳性报告小鼠神经系统肿瘤模型的建立方法及初步的研究。方法1．nestin．GFP转基因报告小鼠的形态学观察(1)应用整体荧光成像观察nestin—GFP转基因报告小鼠在胚胎时期和出生后nestin的表达及动态变化；(2)应用免疫组化和免疫荧光观察成年nestin．GFP转基因报告小鼠脑的nestin的定位和表达。2．ENU化学诱导nestin—GFP转基因报告小鼠后形态学观察(1)胎盘诱导取妊娠木期

7、nestin．GFP转基因报告小鼠19只，按8个剂量：50mg／kg、83mg／kg、167mg／kg、200mg／kg、233mg／kg、250mg／kg、267mg／kg、300mg／kg经腹腔内一坝lj学位论文次性注射1％ENU溶液，子代小鼠出生三周后与母鼠分开，雌雄分笼单独喂养。仔细观察子代小鼠的临床症状，包括睡眠、食欲、步态、体温、精神、体重、毛发的色泽等。(2)直接诱导取成年nestin—GFP转基因报告小鼠13只，按200mg／kg--次性腹腔注射l％ENU溶液，雌雄分笼单独喂养。仔细观察诱导小鼠的临床症状，包

8、括睡眠、食欲、步态、体温、精神、体重、毛发的色泽等。解剖出现症状和频临死亡的二种方法诱导得到的小鼠，所有标本经固定、脱水、石蜡包埋后切片，行HE染色，光镜下判断肿瘤生长情况。3．nestin阳性小鼠髓母细胞瘤模型的建立及初步研究(1)nestin．GFP转基因报告小鼠和Ptch杂合子小鼠(