mirna-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子作用机制的研究

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1、汕头大学硕士学位论文miRNA-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子作用机制的研究硕硕士士学学位位论论文文miRNA-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子题目作用机制的研究THESTUDYOFTHEEXPRESSIONSOFMIRNA-200FAMILY英文题目ANDTHEIRMOLECULEMECHANISMINEPITHELIALOVARIANCANCER姓名徐嘉文学号200571126所在学院医学院导师姓名陈建国专业妇产科学入学日期2005年9月答辩日期2012年5月22日汕头大学硕士学位论文miRNA-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子

2、作用机制的研究I汕头大学硕士学位论文miRNA-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子作用机制的研究中文摘要1上皮性卵巢癌(EOC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，全球每年有>23000例新发及>14000例死亡病例。临床上大多数EOC患者在就诊时都已处于肿瘤晚期，晚期上皮性卵巢癌的5年生存率低于30%。目前对导致这一恶性肿瘤的发生、发展的分子作用机理仍知之甚少，临床上对EOC的早期筛查和早期诊断的难度较大。因此寻找可以在高危人群中筛选、协助早期诊断EOC的患者肿瘤分子标志物及其相关分子机制一直是国内外肿瘤学者研究的热点。近年来，随着基因技术的快速发展，肿瘤分

3、子标志物的研究方向已经从CA125、CA199等蛋白质层面深入到了更本质的基因转录层面。微小RNA(miRNA)是一类长约19～25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过与其靶mRNA分子的3’端非编码区域(3'UTR)互补配对使目标mRNA分子受到翻译水平调控或直接导致其降解，参与调控细胞生长分化、能量代谢、凋亡等各个重要而基本的细胞生理过程。miRNA调节基因表达作用的改变与肿瘤的发生、发展有着密切的联系，因此其作为新的肿瘤分子标志物具有较好的应用前景。miRNA-200家族在EOC中的表达较其它miRNA高，且与正常卵巢组织中的表达相比在EOC中明显过度表

4、达。细胞的表型改变，即上皮-间充质转变（EMT）是肿瘤发生、发展的重要步骤。miRNA-200家族还参与调节其预测靶基因之一—上皮钙粘蛋白转录抑制因子ZEB及其信号网络系统ZEB1/deltaEF1、ZEB2/SIP1，从而通过调节细胞的EMT与MET（间充质-上皮转变）的平衡，最终影响EOC的发生、发展。目前检测miRNA表达最灵敏、可靠的方法是实时定量荧光逆转录聚合酶链反应（qPCR)，但常规的qPCR无法扩增只有19～25个核苷酸组成的miRNA分子，需要特殊的设计或对样品特别处理，常用的处理方法主要包括茎环法和PAP法。2005年，Chen等设计出一

5、种茎环结构的引物，以此代替常规逆转录反应中的随机引物或oligo(dT)引物，对逆转录产物用TaqMan探针实时定量PCR法进行检测，简称茎环法；同年，Shi等利用大肠杆菌poly(A)聚合酶将RNA加上poly(A)尾，用含oligo(dT)的引物进行逆转录反应，对产物用荧光染料SYBRGreenI实时定量PCR法检测，简称PAP法。茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高，但引物设计难度大，检测通量低；PAP法引物设计难度较低，检测通量较高，但特异性和灵敏度较差。PAP法实时定量PCR适于大规模miRNA筛选实验，而本1赞助的基金项目：广东省自然科学基金资助(

6、项目编号：10151008004000033)广东省科技计划项目基金资助(项目编号：2008B060600037)广东省医学科学技术研究基金资助（项目编号：WSTJJ20071015659001196711091248）II汕头大学硕士学位论文miRNA-200家族在上皮性卵巢癌中的表达及其分子作用机制的研究研究采用的茎环法实时定量PCR则适于有针对性地检测小规模miRNA。除ZEB以外，转化生长因子TGF-β2、胰岛素样生长因子受体IGF-1R也是TargetScan软件对miRNA-200家族的常见的预测靶基因，TGF-β2及IGF-1R在EOC中高表达

7、，TGF-β2信号通路及IGF-1R信号通路也参与调节肿瘤发生发展的重要机制之一—EMT，但国内外也尚未有研究证实TGF-β2、IGF-1R是miRNA-200家族的靶基因，TGF-β2、IGF-1R与miRNA-200家族在EOC发生、发展的相关分子机制仍需深入研究。目的：在基因水平及蛋白水平检测miRNA-200家族中的miRNA-200a、miRNA-200c及其预测靶基因TGF-β2、IGF-1R在上皮性卵巢癌组织中的表达，探讨它们的相关性及其与临床病理特征间的关系，为探索miRNA-200家族及其预测靶基因在上皮性卵巢癌的发生、发展机制研究提供新的

8、理论依据，为发掘miRNA-200家族作为新一代的上