livin、survivin和ki-67蛋白在胆囊腺癌组织中的表达及临床意义

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文一in、：SurvivinLivinlVln和Ki．67蛋白、：不UK卜O，虿目在胆囊腺癌组织中的表达及临床意义ExpressionandClinicalSignificanceofLivin、SurvivinandKi一67inGallbladderAdenocarcinoma课题来源：自选课题专业名称临床医学学位申请人王峰波指导教师卢绮萍教授答辩委员会主席吴在德教授答辩委员会成员易继林教授丁志强教授陈孝平教授冯贤松教授论文评阅人丁佑铭教授曹廷加主任医师2012年5月硕士学位论文

2、Livin、Survivin和Ki．67蛋白在胆囊腺癌组织中的表达及临床意义背景：硕士研究生：王峰波指导教师：卢绮萍摘要胆囊腺癌是最常见的胆道系统恶性肿瘤，恶性度高，早期诊断困难，药物治疗效果差，死亡率高。胆囊腺癌的发生、发展是一个多基因联合作用的结果，对参与其中的各种癌基因和抑癌基因不断的研究，并寻找对胆囊腺癌早期诊断、治疗和预后判断等方面有效的方法，已成为当前研究的热点。越来越多的研究显示与细胞恶性增殖和分化受阻一样，凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上亦占有重要地位。凋亡在正常情况下用来消灭DNA受损或细胞循环

3、周期失调的细胞。肿瘤细胞的增殖率并不总是高于相应的正常细胞，这表明肿瘤细胞的积累是细胞逃过“凋亡排除”作用的结果。凋亡调控失调可以异常地延长细胞的生存时间，促进有转化作用的基因突变的积累，从而参与肿瘤的发生。所以肿瘤不仅是细胞增殖分化异常疾病，也是凋亡异常疾病。凋亡抑制蛋白参与抑制细胞凋亡、调节着细胞分裂、细胞周期及信号传导等多个重要环节，与肿瘤的发生、发展关系甚为密切。Survivin和Livin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子，Survivin和Livin在癌组织中的表达与恶性肿瘤的侵袭性、预后均有一定关系。作为

4、一个新的凋亡抑摘要制蛋白，Survivin和Livin在凋亡调节中起着重要作用。与其它的凋亡抑制蛋白家族成员不同，Survivin和Livin在人胚胎组织中高度表达并参与胚胎发育过程中的组织分化和器官形成，在终末分化的成人组织中未有检出，但广泛表达于多种肿瘤组织。研究表明，在许多恶性实体瘤如肺癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和胃肠癌以及一些造血系统恶性肿瘤中均有很强的表达。近年来，Livin和Survivin在消化系肿瘤中的研究更是取得了很大的进展，但关于胆囊癌的研究较少，尤其是Livin与胆囊腺癌的研究未见文献报道

5、。目的：本文应用免疫组化的方法检测Livin、Survivin和硒一67在胆囊腺癌组织中的表达情况，探讨它们与患者临床特征之间的关系，并分析它们之间的相关性。方法：1．收集制作标本所有病例均来源自广州军区武汉总医院2007年至2011年期间收治的胆囊癌病例，选取手术切除后病理诊断明确，术前均未行放化疗且保存完好的存档组织蜡块。选取的40例胆囊腺癌病例，其中男性11名，女性29名；年龄<55岁者17例，≥55岁者23例；肿瘤直径<2cm者16例，≥2cm者24例；根据国际抗癌联盟TNM分期：I期4例，II期13例，Ⅲ

6、期11例，Ⅳ期12例；25例患者伴发胆囊结石，15例无结石；病理分级：高分化6例，中分化10例，低分化24例；淋巴结转移阴性19例，阳性21例。随机抽取20例同期因胆囊息肉手术切除的胆囊组织(取病变范围外2cm并且病理证实无炎症、化生及增生性病变)作为对照组。本实验选取的病例均己取得患者及其家人的知情同意，并签署知情同意书。2．I-IE染色60℃烤片30min，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；磷酸盐缓冲液(PBS)洗5min，反复3次；苏木素染色液染色5min；自来水冲洗去多余的染色液，约10min，蒸馏水洗涤；盐酸酒精

7、分化30秒；自来水冲洗，浸泡15min；伊红染色液染色30s-2min(根据染色结果和要求调整时间)；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。Il硕士学位论文3．免疫组化染色60。C烤片30min，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水后，对组织抗原进行高温热修复；室温下冷却至常温；磷酸盐缓冲液洗5min，共3次，加3％过氧化氢孵育以阻断内源性过氧化物酶活性；磷酸盐缓冲液洗2min，共3次；滴加非免疫性动物血清阻断非特异性结合，20min后甩去封闭液加一抗4。C保湿，过夜：磷酸盐缓冲液洗5min，共3次，滴an-抗，室温孵育30

8、min；磷酸盐缓冲液洗2min，共3次；滴加试剂SABC，室温下20rain，磷酸盐缓冲液洗5min，4次；DAB显色，自来水终止反应并冲洗5min；苏木素轻度复染，清水冲洗；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。4．数据测量胆囊组织中Livin和Survivin表达的判断以胞浆和(或)胞核出现棕黄色染色为阳性，鼬．67的阳性表达为细胞核染成棕黄色。在经过