fk506对高糖培养大鼠视网膜müller细胞生物学特性的影响

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1、同等学力人员硕士学位论文论文题目FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响研究生姓名夏蔚指导教师姓名张晓峰专业名称眼科学研究方向视光学与眼表疾病论文提交日期2012年10月FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响中文摘要FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响中文摘要第一部分视网膜Müller细胞的培养及FK506半数抑制率研究目的:培养、鉴定视网膜Müller细胞，检测FK506对视网膜Müller细胞的IC50，为FK506对Müller细胞的生物学作用研究提供实验基础。方法:采用含10%胎牛血清的DME

2、M培养基(含D-葡萄糖5.5mmol/L)，培养大鼠永生化视网膜Müller细胞。Müller细胞培养12、24、48h倒置显微镜下观察Müller细胞形态并照相记录。以谷氨酰胺合成酶(GS)免疫细胞化学染色鉴定。MTT法检测FK506作用于视网膜Müller细胞的生长抑制率。结果:光镜观察见Müller细胞呈典型的多角形，细胞大小均匀，细胞边界清晰，形态无明显差异。Müller细胞GS抗体免疫细胞化学染色(+)，细胞质中和细胞膜上出现棕黄色、棕褐色颗粒状或者网状物质。MTT法检测Müller细胞的生长抑制率，FK506IC50=75pg/ml。结论:Müller细胞生长

3、良好，FK506的IC50=75pg/ml。关键词:Müller细胞，FK506，生长抑制率第二部分FK506对高糖培养视网膜Müller细胞VEGF表达的影响目的:采用FK506干预大鼠视网膜Müller细胞，观察其对Müller细胞VEGF基因表达的影响，从而探讨FK506对高糖培养的视网膜Müller细胞中VEGF基因表达的调控作用。方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D-葡萄I中文摘要FK506对高糖培养大鼠视网膜Müll

4、er细胞生物学特性的影响糖浓度5.5mmol/L+FK50675pg/ml）,高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK50675pg/ml）。ELISA检测FK506对常规和高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞上清中VEGF的表达。RT-PCR检测Müller细胞中VEGF基因的表达。结果:ELISA检测各组Müller细胞中VEGF浓度：结果表明高糖组比正常对照组细胞上清中VEGF的表达浓度升高（P<0.05）。在高糖+FK506组较单纯高糖组细胞上清中VEGF的表达浓度降低（P<0.05）。RT-PCR检

5、测各组的光密度值：高糖组较正常对照组的视网膜Müller细胞VEGF基因mRNA的表达增高（P<0.05）；高糖+FK506组较高糖组VEGF基因mRNA的表达降低（P<0.05）。结论:FK506可抑制高糖培养的视网膜Müller细胞VEGF的表达。关键词:FK506，视网膜Müller细胞，VEGF,高糖IIFK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响中文摘要第三部分FK506对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响目的:观察FK506对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法:采用常规DMEM培养基(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，配制

6、高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)。实验分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L+FK50675pg/ml）,高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK50675pg/ml）。流式细胞仪检测视网膜Müller细胞凋亡比例。免疫细胞化学染色检测FK506对常规及高糖培养条件下的大鼠视网膜Müller细胞中的P53、Bcl-2、Fas及caspase-3表达的影响。结果:FCM检测各组凋亡比例：提示高糖组较正常对照组的凋亡比例明显上升(P<0.05)；高糖

7、+FK506组比高糖组的视网膜Müller细胞的凋亡比例下降(P<0.05)。免疫细胞化学染色检测各组的OD值：a.高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas及caspase-3的表达较正常组升高（P<0.05）；FK506+高糖组比高糖组视网膜Müller细胞P53、Fas及caspas的表达明显降低（P<0.05）。b.高糖组视网膜Müller细胞Bcl-2的表达较正常组降低（P<0.05）；FK506+高糖组比高糖组视网膜Müller细胞Bcl-2的表达明显升高（P<0.05）。结论:FK506可抑制高糖培养的大鼠视网膜