cripto-1(cr-1)基因在乳腺癌细胞侵袭中作用及机制探讨

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1、江苏大学硕士学位论文Cripto--1(CR--1)基因在乳腺癌细胞侵袭中作用及机制探讨姓名：龚丹丹申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：范钰20120607江苏大学硕士学位论文摘要目的：基于组织芯片了解Cripto-1(CR一1)基因在人乳腺癌中的作用：了解CR-I基因在不同乳腺癌细胞中表达水平；CR-I基因siRNA，转染乳腺癌细胞株，观察对乳腺癌侵袭和迁移的影响；借助于功能分类(转移)基因芯片，从基因水平探讨CR一1基因调控乳腺癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：‘采用免疫组织化学LSAB法检测327例乳腺癌标本中CR-1、laminin及Midkine的表达，并分析CR-I蛋白

2、与laminin及Midkine的关系，同时分析CR一1蛋白与临床病理学特征、淋巴结转移及生存时间的关系。应用荧光实时定量PCR、Westernblot检测CR-I基因在不同乳腺癌细胞系中的mRNA水平与蛋白水平。通过脂质体(Oligofectamine)转染法将CR—l基因siRNA转染乳腺癌细胞，并比较转染后的乳腺癌细胞与未转染的乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用功能分类基因芯片检测CR-1基因siRNA转染乳腺癌细胞后基因变化。结果：1．1)CR-1蛋白表达于乳腺癌细胞质，阳性表达率为78．O％(255／327)，其表达与CerbB2(r=O．249，P=O．000)、淋巴结I

3、江苏大学硕士学位论文转移个数(r=0．301，P=0．000)、组织学分级(r=0．210，P=0．000)呈正相关；2)laminin表达于细胞膜，CR-I的表达与laminin的表达(r=0．292，P=0．000)呈正相关：Midkine表达于细胞质中，CR-I的表达与Midkine的表达(r=0．415，P=0．000)呈正相关。3)Kaplan—Meier生存分析结果显示CR—l蛋白的表达程度与患者的生存率呈明显负相关(P=0．017)。2．在所检测的组细胞系中，SK—BR-3细胞株CR-ImRNA的表达水平最高。3．乳腺癌细胞经CR一1基因siRNA转染后，其CR-I基因的

4、mRNA水平与蛋白水平明显降低，且增殖、侵袭及迁移能力明显下降。4．经功能分类基因芯片检测，共有36个基因表达发生明显改变，其中表达上调的基因有11个，表达下调的基因有25个。结论：CR-I蛋白的表达与乳腺癌的侵袭、转移密切相关，是导致预后不良的因素。在临床工作中，研发针对CR-I基因的靶向药物有望对乳腺癌的治疗取得新进展。关键词：CR-I蛋白，乳腺癌，功能分类基因芯片，siRNA江苏大学硕士学位论文Objective：ABSTRACTToexploretheroleofCripto—l(CR一1)geneinhumanbreastcancerbytissuechip．Toknowth

5、eexpressionlevelofCR-1geneindifferentbreastcancereelllines．Toobservetheaffecttoproliferation，invasionandmetastasisabilitiesofhumanbreastcancercell，bytransfectingonebreastcancercelllinebyCR一1-siRNA．TostudythemolecularmechanismofhowCR一1genecontrolshumanbreastcancercellinvasionandmetastasisabilityb

6、yfunctionalclassificationgenechip．Methods：ImmunohistochemistryforCR一1wasperformedontissuemicroarraycontainning327casesofbreastcancerusingLSABmethod．TherelationshipbetweenCR．1．1amininandMidkineinbreastcancerwasanalyzed．Additionally，therelationshipbetweentheCR-1proteinandinvasion，metastasisandsurv

7、ivaltimeinpatientswasanalyzed．TheexpressionlevelofCR-1mRNAandCR．1proteinindifferentbreastcancercelllineswasdetectedbyreal．timePCRandWestemblot．Theabilitiesofproliferation，invasionandmetastasisofbreastcancercellswerecomparedb