c-met基因沉默联合传统放化疗对结肠癌sw620细胞毒性的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文c--Met基因沉默联合传统放化疗对结肠癌SW620细胞毒性的影响姓名：李磊申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：李中信201203中文摘要c．Met基因沉默联合传统放化疗对结肠癌SW620细胞毒性的影响摘要目的：研究RNAi技术敲低结肠癌SW620细胞c．Met基因后对放化疗敏感性的影响，c．Met很有可能成为结直肠癌治疗的新生物靶点，针对c．Met的靶向治疗联合传统放、化疗对结直肠癌的治疗带来益处。方法：运用慢病毒介导的RNAi干扰技术得到稳定的可调控的针对c．Me

2、t基因表达的pSD400．C．Met-shRNA．SW620细胞株以及非针对c．Met基因表达的pSD400．scramble．shRNA．SW620细胞株和未行干扰技术的SW620细胞株，利用多西环素(DOX)对不同稳定细胞株细胞进行诱导，使得经过慢病毒介导的细胞35系中发生RNAi干扰，使pSD400．c．Met-shRNA．SW620细胞系中适当表达针对c．Met基因的shRNA，从而适当敲除c．Met基因，使其表达下调，进而分别检测三组稳定细胞系中肿瘤细胞对不同化疗药物(5．Fu、顺铂)

3、的敏感性及对不同放疗剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)的敏感性的影响。结果：l、人结肠癌细胞株SW620细胞为高分化上皮细胞，在10％完全培养基的环境中2—3d可铺满培养瓶；pSD400．c．Met-shRNA。SW620细胞株在不含DOX的情况下可正常生长，细胞呈梭状或多边形，细胞间连接紧密。2、在DOX诱导下shRNA干扰pSD400．C．Met．shRNA-SW620细胞系细胞c．Met基因表达，不同DOX浓度可见不同程度c-Met基因表达缺失。3、pSD400．c．Met．s

4、hRNA．SW620细胞在不同5．Fu浓度，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(toug／m1=2．009，P=0．072、t1．25uedml=2．302，P=0．04、t5u咖l=2．687，P=0．023、t20u咖l=2．569，P=0．028、tsoug／mi=0．321，P=0．755)。pSD400．scramble．shRNA．SW620细胞株和SW620细胞株在不同5．Fu浓度，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P>O．05)。4、pSD40

5、0．C．Met．shRNA．SW620细胞在不同顺铂浓度，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(toug／mi=0．604，P=0．559、tlug／rni中文摘要=4．491，P=0．001、t2ug／m1=3．338，P=0．008、t8u跏ll=2．338，P=0．042、t32ug／ml=3．262，P=0．009)。pSD400．scramble．shRNASW620细胞株和SW620细胞株在不同顺铂浓度，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P>O．05

6、)。5、pSD400．C．Met．shRNA．SW620细胞在不同照射剂量，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用有明显差异(toGy_1．797，P=0．103、t2Gy=3．706，P=0．004、t4Gy=4．916，P=0．001、时3．821，P=0．003、tsGy=2．234，P=0．049)。pSD400．scramble．shRNA—SW620细胞株和SW620细胞株在不同照射剂量，经加DOX与不加DOX处理后细胞的杀伤作用无明显差(P>O．05)。结论：本实验研究利用慢病

7、毒介导的RNAi干扰技术处理人结肠癌细胞株SW620后得到稳定的可调控表达针对c-Met的pSD400．C．Met-shRNA．SW620和pSD400．scramble．shRNA．SW620细胞株，通过DOX诱导作用产生shRNA使得pSD400．C．Met．shRNA．SW620细胞发生针对性发生c．Met基因沉默从而对不同浓度化疗药物(5．Fu、顺铂)及不同照射剂量(OGv、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)的敏感性明显增强。1、不同浓度的化疗药物(5．Fu、顺铂)对pSD400．C．Me

8、t．shRNA—SW620、pSD400．scramble．shRNA．SW620和SW620细胞的敏感性明显不同，DOX诱导下发生c-Met基因沉默的pSD400．C．Met．shRNA—SW620细胞对不同浓度的化疗药物(5．Fu、顺铂)的敏感性最强。2、不同照射剂量(0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)对pSD400一C—Met-shRNA．SW620、pSD400．scramble．shRNA．SW620和SW620细胞的敏感性明显不同，DOX诱导下发生c．Met基因沉默的pSD40