放化疗联合对肺癌细胞凋亡影响的实验研究

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1、上海第二医科大学硕士学位论文放化疗联合对肺癌细胞凋亡影响的实验研究姓名：杨念钦申请学位级别：硕士专业：影像医学与核医学指导教师：黄钢2003.5.1上海第二医科大学硕士学位论文中文摘簧放化疗联合对肺癌细胞凋亡影响的实验研究中文擦要薅癌邑成为发这鏊家瘸疰死亡瓣主要艨因l“。在歇潮集体薅梭，单撬痰裣及HCT联合应用被推荐使用于肺癌的早期诊断【21。每年全世界大约有50多万释癌惠者竣诊凝。手术、敝疗、纯疗仍是三大主要方法，瞧NSCLC的大部分患者都无法手术，近40％表现为局部严重的难以切除的损害。若单独使用放疗，平均存

2、活约9．10月，5年存滔率约7％【3j，联合放疗化疗可提高5年存满率约3。4倍。选年来提勰局部控制的方法主要鸯：放疗壤敏药物约运展，许多获辨瘗药物惫摇顺铂、紫杉醇等均育放射增敏的潜能【4】；改变放疗方案；使用三维综合治疗等。磷突表鹗，敷辫浚瘳过程不仅鼹A549缨藏增殪产生掠裁，瑟显虿叛键迸绣魏凋亡，肿瘤细胞过魔增生及凋亡不足为肿瘤发生的机制之～[51，因此，利用联合化疗药物与镦离辐射诱导A549缀驻糯亡班逡弱捧稍蹋您遘度灞蓬，裔望成为综合治疗的新途径之一。本课磁以非小细胞肺腺癌细胞株A549的凋亡为研究对象，应用

3、32P对其进行内照射，j嚷铂进行忧疗。通过细鼹计数，MTT法计数、浚式缨瓤仪、透射电镜及免疫细胞化学检测等方法，就辐射后A549细胞的活力改变、细胞凋亡率、缨鼹超微终麴改变及攘关基霆表达遴行了探讨。主蒙疼容及续罴热下：一、辐射荆量的计算：在成用6射线放射性核素进行贴壁培养细胞A549照射轿究簿，培养缀麓吸枝翻薰静诗簿主要参照：D=0．5×(％／0。693)加(1呻∞^693田)￡慨Bi)1．6×10"13／(p。v)，采瘸上述公式作为缀牧裁蠢的佶算，因为该公式使期简便，可靠性强，与MIRD方案计算结果基本～致。同

4、时，经放射性核素的细胞代谢排斥实验证实，应用稳定性同位素(光菌PBs磷酸缓冲渡)终放射牲核索鲍载髂，可以竞争经捧裁藏射毪核素32P掺入爨缀胞内参与代谢，可以用这种方法来模拟细胞所受近躐离照射。二、矮镶及3冷鼹A549缨藤橡懿存滔褰及缩藏凋亡率豹影确。探讨A549细胞株在接受p一射线放射性核素32P照射以及化疗药物顺铂作用时，以台盘黻排上海第二医科大学硕士学位论文中文摘要斥实验、MTT法观察其量效关系。本实验应用了”P进行不同剂量的内辐射，不同剂量的顺铂以及二者联合作用进行研究。结果表明：应用台盘蓝排斥实验和MTT

5、法进行细胞存活的检测，二者的结果完全一致，即随着”P辐射剂量和化疗药物顺铂剂量的增加，A549细胞存活明显下降，而且应用不同两种方法其变化趋势完全一致，联合应用的存活衄线左移，同时低剂量率辐射15uCi／mt，对细胞的致死性损伤作用不明显，细胞存活率、流式细胞术分析的细胞凋亡率仅轻微变化，但可能引起细胞的增殖死亡，即该细胞照射后不会立即死亡，但细胞最终丧失分裂能力。顺铂具有辐射增敏作用，即当仅能部分抑制A549细胞增殖的低剂量辐射15uCi／ml与顺铂2．5ug／ml联合应用时，细胞存活率显著下降，细胞凋亡率上升

6、，而且在低剂量内辐射联合应用较低的治疗剂量顺铂时，可达到与单独使用高剂量的内辐射相当的治疗效果，从而在不影响治疗效果的前提下，有效的减低了辐射剂量的使用，如此便可显著减少毒副作用的影响，利于在实际当中的应用。三、联合应用对A549细胞株凋亡相关基因表达及细胞超微结构改变的影响。为了进一步了解A549细胞凋亡发生的分子生物学机制，应用免疫组织化学法检测P53,bcl-2，bax基因辐射前后的表达，以及通过透射电子显微镜观察细胞超微结构的改变和细胞凋亡的形态特征。实验显示：13-辐射诱导A549细胞凋亡过程中上述基因

7、参与调控，表现为P53及bax表达显著上调，而bcl-2／bax比值明显下调。低剂量辐射2．52Gy联合2．5ug／rnl顺铂组，电镜下细胞超微结构严重破坏，线粒体明显肿胀、嵴断裂或呈空泡状，染色质边缘化，核浓缩或碎裂，大量细胞呈典型凋亡改变，甚至碎裂坏死；流式细胞术检测细胞凋亡率明显上升。因此，联合应用低剂量顺铂2．5gteCml和低剂量辐射2．52c-y时，既能显著促进肿瘤细胞凋亡的发生，又能有效降低二者的剂量和减少治疗对患者的毒副作用，为临床综合治疗肺癌提供了一种理想的方法，而其机理仍需要进一步深入研究。[

8、关键词】细胞凋亡A549细胞放射治疗化学治疗上海第二医科大学硕士学位论文荚文摘要TheexperimentresearchofinfluenceinradiotherapycombinewiththechemotherapytothelungcancercellapoptosisLungcancerhasbecomethemajorreasonofcancerdeathi