arc基因在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌细胞放化疗敏感性的研究

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1、分类号VDC博士学位论文密级ARC基因在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌细胞放化疗敏感性的研究StudyexpressionofARCinnasopharyngealcarcinomaande～ctradiotherapydCarclnomaanellect0nanoranlotnerapychemotherapysensitivityinnasopharyngealcarcinomacells作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导老师：吴平耳鼻咽喉科学湘雅医院赵素萍教授论文答辩日期囟】Z‘=圭墨}-答辩委员会主席中南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研

2、究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。储繇卑日期．地年上月斗日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社

3、会公众提供信息服务。期：趁fz年±月址日博士学位论文中文摘要摘要癌变是一个复杂的过程，是由癌基因激活，抑癌基因和细胞死亡机制失活相互作用而出现的。由于细胞凋亡的减少与肿瘤发生密切相关，这提示凋亡过程中起负调控有关的基因可能有致癌性，而促进细胞凋亡有关的基因可能为肿瘤抑制基因。因此，凋亡相关蛋白一直是肿瘤研究的热点领域。本文将分章讨论一新颖抗凋亡蛋白ARC与鼻咽癌发生、发展的关系及对鼻咽癌放疗与化疗敏感性的影响。第一章ARC在鼻咽癌中的异常表达及其临床意义目的蛋白水平探讨鼻咽癌组织及鼻咽部炎症组织中ARC的表达与肿瘤T分期、临床分期和有无淋巴结转移等临床病理学参数的关系，并检测ARC在鼻咽癌细

4、胞系中的表达水平及细胞内定位。方法采用免疫组织化学的方法检测82例鼻咽癌组织、20例鼻咽部慢性炎症组织的石蜡组织标本，分析其在鼻咽癌组织中的表达与临床病理学参数的关系。采用细胞免疫组化检测ARC在鼻咽癌细胞株中的表达定位，Westemblot实验方法检测ARC在鼻咽癌细胞株中的表达。SPSS17．0统计软件对实验数据进行统计分析。结果1)通过鼻咽癌组织及细胞的免疫组化检测，结果发现ARC表达于细胞浆及细胞核内，其中大部分表达于细胞浆。2)ARC蛋白在鼻咽癌组织中的表达强度明显高于鼻咽部炎症组织(P

5、5例为弱阳性(18．3％)；鼻咽部慢性炎症组织中，16例为弱阳性(80％)，4例为中度阳性(20％)，无强阳性。3)ARC蛋白的表达与鼻咽癌的临床分期、病理分型因素相关(PO．05)。4、)ARC在鼻咽癌细胞株CNE．1、CNE一2、5—8F、6—10B中均有明博士学位论文中文摘要显表达，而在鼻咽永生化上皮细胞NP69中表达最弱；其相对表达量分别为CNE．1(4．78士0．47)、CNE．2(5．39+0．58)、5．8F(3．54i0．33)、6．10B(3．12+0．26)、N

6、P69(1．67士0．24)。在鼻咽癌细胞株中表达的表达量由高到低依次为CNE．2>CNE．1>5-8F>6．10B。结论以上结果提示ARC在鼻咽癌的发生、发展中可能起重要作用，临床上检测ARC的表达对鼻咽癌恶性程度的预测可能会有所帮助。关键词鼻咽癌，ARC，免疫组织化学，Westemblot第二章构建并筛选沉默ARC基因的miRNA质粒和过表达ARC基因的pEZ．M03质粒目的使用RNA干扰技术及基因克隆技术分别沉默和过表达ARC在鼻咽癌细胞株中的表达，并筛选出稳定转染的细胞株。方法使用pcDNA6．2．GW／EmGFP／miRNA载体构建表达miRNA对ARC基因的RNA干扰的质粒；使用

7、pEZ．M03载体构建表达ARC基因的质粒。采用脂质体转染法将构建的ARC．miRNA及对照no．targe．miRNA质粒转染高表达ARC的CNE一2细胞；将pEZ．M03．ARC及对照pReceiver-M03CT质粒稳定转染低表达ARC的6．10B细胞。通过荧光显微镜观察质粒转染效率，CCK．8法检测细胞生存率，荧光定量PCR、Westernblot法检测ARC表达效果，通过流式细胞仪检测ARC对细胞周