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1、HPLC法测定注射用前列地尔杂质前列腺素A1的方法学研究1杭州澳亚牛物技术有限公司杭州310018；2白杨街道社区卫生服务中心杭州310018摘要：目的验证HPLC法测定注射用前列地尔杂质前列腺素A1的方法。方法釆用C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱，以乙月青・0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)(40：60)为流动相，检测波长为214nmo结果方法的专属性及耐用性良好；在前列腺素A1进样量为14.55〜232.80ng范围内与色谱峰面积线性关系良好;平均回收率在99.6%〜101.5%之间，
2、相对标准差RSD为0.65%。结论木方法简便、快速、灵敏,可有效检测前列腺素A1。关键词：前列地尔；前列腺素Al；HPLC前列地尔是一种疗效确切的血管扩张药，是一种人体牛理物质，有抑制血小板聚集、血栓素A2牛成、动脉粥样脂质斑块形成及免疫复合物的作用，并能扩张外周和冠脉血管。木研究拟对高效液相色谱法测定注射用前列地尔的有关物质前列腺素A1方法学的专属性进行验证。1仪器与试药仪器：Agilent1200高效液相色谱仪；色谱柱：AgilentZORBAXEclipseXDB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；
3、前列地尔对照品:中国食品药品检定研究院140659-201203；前列腺素A1对照晶：中国食品药品检定研究院140790-201001；注射用前列地尔：杭州澳亚牛物技术有限公司13102023、13103123、13103125c2方法与结果参照《中国药典》2010年版二部注射用前列地尔标准的前列腺素A1检查项色谱条件进行。2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙m-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)(40：60)为流动相；检测波长为214nm；进样量为50μl。2.2供试品溶液的制备取本品适量，加25%乙
4、醇溶液溶解并稀释制成每lml中约含前列地尔O.lmg的溶液，作为供试品溶液。2.3对照溶液的制备取前列腺素A1杂质对照品适量，精密称定，用25%乙醇溶液溶解并稀释制成每lml中约含3μg的溶液，作为杂质对照品溶液。2.4测定波长的选择前列腺素A1和注射用前列地尔在波长范围为190nm〜400nm进行紫外扫描，并在214nm处测定吸光度，显示在214nm处有吸收。2.5专属性试验2.5.1酸破坏试验：取注射用前列地尔样品1支，加入0.5ml浓度为0.5mol/L盐酸溶液，放置30分钟后，加入0.5ml浓度为O.5mol/L氢氧化
5、钠溶液,混匀，中和，立即精密量取50μl,注入液相色谱仪；2.5.2碱破坏试验：取注射用前列地尔样品1支，加入0.5ml浓度为O.Olmol/L氢氧化钠溶液，放置5分钟后，加入0.5ml浓度为0.01mol/L盐酸溶液，混匀，中和，立即精密量取50μl,注入液相色谱仪；2.5.3氧化破坏样品：取注射用前列地尔样品1支，加入lml浓度为35%H2O2溶液，放置10分钟，立即精密量取50μl,注入液相色谱仪；2.5.4光照破坏样品：取注射用前列地尔样品1支，加25%乙醇溶液溶解，放置在（4500±500l
6、x）的灯光下照射24h,立即精密量取50μl,注入液相色谱仪。2.5.5高温破坏样品：取注射用前列地尔样品5支，加25%乙醇溶液定容至5ml,放置水浴中加热4h,立即精密量取50μl,注入液相色谱仪。另取适量辅料同法处理，记录色谱图结果：本品溶液经酸、碱、氧化、光照、高温条件下产生的前列腺素A1杂质峰与主峰有效分离，而辅料对于有关物质（前列腺素A1）的检查无干扰。表明该法对于检测本品的有关物质（前列腺素A1）及其本品稳定性试验考察产生的降解产物（前列腺素A1）是可行的。2.6溶液稳定性试验精密称取前列腺素A1适量，加25
7、%乙醇配制成浓度约为3μg/ml的溶液，参照前列腺素A1项下的方法，分别于0、2、4、6、8、10、12小吋取样50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：前列腺素A1测定液在12h内的RSD%为0.37%,小于2.0%,本品在12小时内稳定。2.7前列腺素A1定量限取前列腺素A1适量g,加25%乙醇稀释制成浓度约为3μg/ml的溶液，按比例逐步稀释，记录色谱图，按信噪比10：1计算定量限。结果:当信噪比为10.3Ut,定量限为14.55ngo2.8前列腺素Al标准曲线与线性范围取前列腺素A1杂质对照品适量,以25%
8、乙醇为溶剂，制成浓度为3μg/ml的溶液，分别精密量取5、10、20、30、40、50、60、70、80μl,注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量为x轴，峰面积A为y轴，进行线性冋归，结果见下图。结果：各浓度下的平均冋收率
