通络方剂对糖尿病大鼠肾脏p38mapk-fn通路影响

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1、通络方剂对糖尿病大鼠肾脏P38MAPK-FN通路的影响摘要糖尿病肾病是糖尿病重要的微血管并发症之一，它在病理结构上主要以系膜增生，基底膜增厚为特点，最终出现肾小球硬化、间质纤维化。P38是MAPK家族的成员之一，在糖尿病肾病的发生、发展中起了重要作用，它参与细胞外基质纤维化等诸多生理病理过程。通络方剂(TongluoRecipe,TLR)是根据中医络病学理论研制而成的复方制剂，由人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鳖虫和赤芍等药物组成，本课题组前期研究表明，其对糖尿病肾病具有保护作用，在糖尿病大鼠肾脏中，可以通过抑制RAS系统、抗氧化、改善血管内

2、皮细胞功能等机制发挥作用。然而，通络方剂对糖尿病肾脏纤维连接蛋白（FN）的影响，目前尚无相关报道。本实验使用链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型，观察TLR对糖尿病大鼠肾脏P38MAPK-FN通路相关蛋白及其病理结构的影响，进一步探讨TLR对糖尿病肾脏保护作用的可能机制。本研究通过自动化生化分析仪检测正常对照组、糖尿病组、通络方剂干预组大鼠血糖、血尿素氮、血肌酐、左肾重/体重、24小时尿蛋白、尿蛋白/肌酐比；肾皮质PAS染色；电镜观察肾小球基底膜；蛋白质印迹分析检测t-p38MAPK，p-p38MAPK，t-CREB(环腺苷酸反应元件

3、结合蛋白，CAMPresponseelementbindingprotein)，P-CREB，FN(纤维连接蛋白)蛋白表达情况，发现糖尿病组大鼠肾功能损害明显，肾小球增大，系膜增生，p-p38MAPK，P-CREB，FN蛋白表达明显增加，通络方剂干预后，明显改善肾功能，下调p-p38MAPK，P-CREB，FN蛋白的表达。通络方剂可能通过抑制p38MAPK-FN信号通路，对糖尿病肾病大鼠肾功能产生保护作用。目的：研究TLR对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏p38MAPK-FN信号转导通路的影响，探讨TLR对糖尿病肾脏保护作用的可能机制。方法：

4、研究对象：健康、无特定病原体（SPF）级SD大鼠。CON对照组（N＝7），糖尿病未干预组DM（N＝7）和糖尿病通络方剂组DM+TLR（N＝7）。第一部分：采用全自动生化分析仪检测大鼠静脉空腹血糖、血尿素氮、血肌酐，尿肌酐，放射免疫法检测24小时尿蛋白。肾皮质PAS染色。电镜观察肾小球基底膜。第二部分：蛋白质印迹分析检测肾皮质组织中t-p38MAPK，p-p38MAPK，t-CREB(环腺苷酸反应元件结合蛋白，CAMPresponseelementbindingprotein)，P-CREB，FN的蛋白表达。-1-第二军医大学硕士学位论文

5、结果：1．一般情况：大鼠注射STZ1周后，尾静脉采血测血糖>16.7mmol/L，可确定糖尿病模型制备成功，造模成功率86.7%。此后每周监测血糖1次，血糖均维持在l6.7mmol/L以上，模型稳定性良好。大鼠注射STZ后36～48h出现多饮、多尿，第3～4天多食明显，精神不振，毛发干枯，光泽度下降，“三多一少”症状典型。CON组大鼠饮食、饮水、尿量正常，毛发光亮，体质量自然增加。经通络方剂治疗后，糖尿病大鼠反应灵敏，毛发光泽度有所增加，“三多一少”症状减轻。2.大鼠生化指标与CON组相比，DM组大鼠平均左肾重/体重比、血糖、血尿素氮、

6、肌酐、24小时尿蛋白、尿蛋白/肌酐显著增加（p<0.05）。与DM组相比，DM+TLR组除血糖、尿素氮之外，这些参数是显著降低（p<0.05）。3.肾皮质PAS染色DM组与DM+TLR组，可以看到肾小球增大，系膜基质增生，CON组未显示。与DM组相比，DM+TLR组大鼠基质、系膜增生较少。4．电镜观察肾小球基底膜DM组与DM+TLR组，可以看到肾小球基底膜增厚，CON组未显示。与DM组相比，DM+TLR组大鼠肾小球基底膜增厚较少。5.肾皮质t-p38，p-p38,t-CREB，P-CREB,FN水平与CON组相比，DM组t-p38,t-

7、CREB没有改变（p>0.05），p-p38增加2.37（p<0.05）,p-CREB增加2.21（p<0.05）,FN增加2.03（p<0.05）；与DM组相比，DM+TLR组显著降低p-p38,p-CREB,FN（p<0.05）；对t-p38,t-CREB没有改变（p>0.05）。结论：通络方剂可能通过抑制p38-FN通路，对糖尿病肾病大鼠产生保护作用。关键词：糖尿病肾病，通络方剂，肾功能不全，p38丝裂原激活蛋白激酶，纤维连接蛋白-2-通络方剂对糖尿病大鼠肾脏P38MAPK-FN通路的影响AbstractDiabeticnephr

8、opathyisoneofdiabetesimportantcapillaryvesselcomplications,itsprimarypathologyismesenteriahyperplasia,b