去卵巢大鼠颅骨il-10表达水平的研究

《去卵巢大鼠颅骨il-10表达水平的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、去卵巢大鼠颅骨IL-10表达水平的研究覃淑云1蔡科军1冯照善1张庆金1韦启后2(1广西柳州医学高等专科学校545006;2广西柳州市疾病预防控制中心545007)【中图分类号1R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)35-0153-02【摘要】目的观察研究去卵巢SD大鼠前后颅骨组织中IL-10的表达水平，探讨绝经后IL・10对骨质疏松影响的机制。方法SD雌性大鼠随机分为正常对照组和去卵巢(OVX)后第5周组、第7周组；双能X线吸收法测定骨密度(BMD)；取颅骨采用免疫组织化学ABC法及图像分析技术观察颅骨组织中IL-10表达变化。结果OVX组与对照组比

2、较BMD明显下降；IL・10在骨小梁和骨髓的分布类似，IL-10分布在骨小梁周边成骨细胞中，骨髓基质细胞也成阳性染色，成骨细胞染色要浅于基质细胞。去势组骨小梁周边阳性成骨细胞要明显少于对照组，并且染色较对照组浅。结论去势引起骨组织ILJ0表达下降，ILJ0在骨质疏松发病机制中起着重要作用。【关键词】卵巢切除大鼠IL-10免疫组织化学骨质疏松是一种常见的全身性骨骼疾病，主要表现为骨密度降低和骨骼脆性增加，从而导致了骨折增加的风险。绝经后骨质疏松的发病机制目前仍未清楚，目前研究发现IL・1、IL・2、IL・6、IL・8、IL・10、TNF等一系列的细胞因子在绝经后妇女骨质疏松患者与非骨

3、质疏松者体内的含量是不同的，细胞因子通过自分泌与旁分泌的方式参与调控骨的吸收与形成，但哪一个细胞因子是主要的调控因子目前尚未明确，目前多数研究集中在ILJ、IL-6和TNF上，而对绝经后骨质疏松后局部骨组织中的IL-10的表达研究不多，我们用雌性大鼠去势后建立绝经后骨质疏松动物模型，用免疫组织化学法及图像分析观察骨组织中IL-10表达的变化，探讨绝经后IL-10对骨质疏松影响的机制。1•材料与方法1.1动物分组与处理选用40只SD雌性大鼠，15周龄，体重(205±15)g，随机分为去势组和对照组，其中去势组又分为第5周和第7周两个时间组，每组20只SD大鼠。去势组大鼠

4、均用1%戊巴比妥钠腹腔内麻醉(30mg/kg),下腹部切口，去势组行双侧卵巢切除术，而对照组仅行开腹术。各组大鼠分笼饲养，标准大鼠饲料，自由进水、进食。1.2标本采集与制备各组处死后取大鼠颅骨标本，一部分用10%福尔马林固定，24h后复合酸脱钙3d梯度乙醇脱水、透明、石蜡包埋、切片(厚度约5um)o1.3骨密度(BMD)测定各组大鼠处死前称体质量,2%戊巴比妥钠(40mg/kg)JJM腔注射麻醉，采用双能X线骨密度仪提供的小动物全身骨密度测定软件，进行全身骨密度测定，将目标区的面积设定为0.05cm2,每个目标骨取3个点进行测量，每个标本进行3次扫描记录其平均值。1.4免疫组织化学

5、染色及观察采用ABC法进行免疫组织化学染色，切片经梯度乙醇处理，正常血清封闭后，加入鼠抗人ILJ0多克隆抗体(上海西唐生物科技有限公司)，工作浓度1：50,4°Ca夜,PBS洗后加生物素标记兔抗鼠lgG(l:500)37°C,经ABC复合物37°C处理。40min后用PBS洗，在过氧化氢液和DAB的显色液中显色，系列乙醇脱水、二甲苯透明、树脂封片、光镜下观察。每次均设阴性对照，用PBS代替一抗孵育做空白对照，结果为阴性。1.5图像分析标本结果采用imageproplus5.0图像分析软件，测定骨小梁阳性细胞染色灰度值，每张切片随机选取5个高倍视野(X400),取其平均值作为该标本阳

6、性细胞灰度值。1.6统计学分析采用SPSS15.0统计软件包进行分析。计量数据以均数±标准差表示，t检验用于组间差异比较，p<0・05为显著性水平。2.结果2.1各组人鼠骨密度检测结果见表1。表1对照组与去卵巢组大鼠BMD检测结果2.2IL-10免疫组织化学结果免疫组织化学观察IL-10在骨小梁和骨髓的分布类似，ILJO主要分布在骨小梁周边成骨细胞中，骨髓基质细胞也成阳性染色，成骨细胞染色要浅于基质细胞。去势组骨小梁周边阳性成骨细胞要明显少于对照组，并口染色较对照组浅,去势组第5周和第7周结果相似，结果见表2。表2IL・10阳性细胞灰度值■注：与对照组比较△:P

7、V0.05*:P<0.013•讨论本实验结果显示去卵巢大鼠第5周组和第7周组骨密度(BMD)明显小于对照组，说明去势第5周即可出现明显骨质疏松，去卵巢大鼠的绝经后骨质疏松症模型已经形成。有报道，骨质疏松是一种骨组织微环境恶化，矿物质流失的全身性骨骼疾病，最终的结果就是骨质脆化导致骨折的发生⑴。有两种细胞在这一过程中起到了关键作用，一种是成骨细胞(OBs),成骨细胞的作用是构建骨质，由间充质细胞分化而来，间充质细胞可以分化成骨髓基质细胞或者是脂肪细胞，成熟的成骨细胞持续