喹噁啉类药物致突变分子机理的研究

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1、》英文缩写AmpBpBSAmTGX-galPCRSDSODMinLBPBSSecrpmDMEMDMSOEB英文缩略语ABBREvlATlONS英文原文AmpicillinBasepairBovineserumalbuminIsopropyl-b--D--thilgalactoside5-bromo-4chloro-3-indolyl—B-D—galactosidasePolymerasechainreactionSodiumdodecylsulphateOpticaldensityMinureLuria-bertinimedi

2、umPhosphatebufferedsalineSecondRoundperminuteDulbecco’sModifiedEagleMediumDimethylsulfoxideEthidiumbromide中文氮苄青霉素碱基对牛血清白蛋白异丙基．B-D．硫代半乳糖首5一溴-4．氯一3．吲哚一6-D。半乳糖营聚合酶链式反应十二炕基硫酸钠光密度分钟LB培养基磷酸盐缓冲液秒每分钟转速Dulbecco虽低要素营养液二甲基亚砜溴化乙锭韩豫独创性声明Y939520本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果

3、。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名酿，一螽时间：P‘年g月，铜关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文

4、的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名导师签名骼唁时问时间一6年6月，5日o6年6月【bF=

5、-筠．bY鼍彰％1．1单细胞凝胶电泳技术第一章综述单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresisassay,SCOE)义称彗星试验(cometassay)，是一种快速、灵敏的检测单个细胞DNA断裂的技术，由OstlingtI】等7-"1984年首次提出，并利用该技术在中性条件下检测C射线引起的DNA域链断裂。1988年，Stagt21等建立了碱性单细胞凝胶电泳技术，该技术不仅可以检

6、测DNA单、双链断裂，还可用来检测碱性不稳定位点、DNA交联和不完全切除修复位点等。1996年，Collins[31等对该方法进行了进一步改进，并利用核酸内切酶和甲酰胺嘧啶糖基酶分别检测了氧化嘧啶和8．羟基鸟嘌呤的损伤。1997年，Santos[41等首次将SCGE技术与DNA荧光原位杂交技术(fluorescenceinsituhybridization，FISH)结合起来，为SCGE技术的应用开辟了新的途径。我国朱志良博士率先在国内建立了彗星一荧光原位杂交技术体系，并利用该技术体系发现人9号染色体是苯代谢产物的靶染色体。彗

7、星试验方法适用范围厂泛，该方法适用于各种体内体外试验，凡是能制成单细胞悬液的各种真核生物细胞均适用于彗星试验，另外彗星试验的独特之处在于，可以检测单细胞的DNA损伤，这就为受试物毒作用的靶细胞定能提供了可能【L6,7]。1．1．1SCGE技术原理当各种内源性年¨外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位；中性条件时，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱处理和

8、碱性电解质作用F，DNA发生解螺旋，DNA环向外伸展，损伤的DNA断链缺口暴露了阴性电荷．高pH促使DNA变性和解螺旋，从而有利丁单链和双链DNA断片的移动。在电场力作用下，细胞核中带阴性电荷的DNA断片离开核DNA在凝胶分子筛中向阳极移动t形成“彗星”状图像，DNA链缺口越多，进入尾部的DNA越多，表现为尾长和尾部荧光强度增加；来损伤细胞在电泳中DNA仍停留于核中形成圆形荧光团⋯”。在一定条件下，DNA迁移距离(彗星尾长)平¨DNA含量(荧光强度)分布与DNA损伤程度呈线性相芙，因此，尾矩(尾部DNA的含簧与尾长的乘积)被作

9、为SCGE定量分析的主要依据[9,22】。1．1．2SOGE实验方法作为检测DNA原始损伤的试验，SCGE试验应用哺乳动物要比细菌试验(DNA修复试验和SOS显色试验)和噬菌体试验更有利于将试验结果外推于动物平If人；另一方面它又比同样应用哺．乳动物细胞的姊妹染色单体交换实验