大肠杆菌磷酸吡哆醇氧化酶乙酰化位点突变对酶活性影响论文

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2、IUllIIIIIIIIIIIIY2393992华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学斑论文否如需保密，解密时间年月曰是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究l成果。尽我所知，除了文中特别加以标注韧致谢的地力外，论文中不包含其他人巳i经发表或撰写过的研究成粟，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位i或证书丽使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同二[作的同志对本研究；所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。i研究生签名：新伊辣时间：列；年6月哆目．学位论文使用授权书本人完全了篇华中农业大学关予+保存、使惩

3、学位论文的规定，即学生必须按照静"3-校要求提交学位论文的印剥本和电子版本；学校有权躁存提交论文的印剩版和电子版，并提供露录检索和阕览服务，可以采用影f!

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5、、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人弱意华中农业大学。圊。以周不阉方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并授权中雷科学技术涪息研究所和：{匕京万方数据毁份有限公司将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并避行信息服务(包括但不限于汇编、复制、发行、信息曛络传播等)，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授

6、权书。学位论文作者签名：裔伽辣导师签名：葛z移醪签名日期：叫弓年6月哆目签名医期：细踢年占j{，弓嚣大肠杆菌磷酸毗哆醇氧化酶乙酰化位点的突变对酶活性的影响目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．iAbstract⋯⋯⋯．⋯．．⋯．⋯．⋯．⋯⋯．．⋯⋯．⋯．．⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯．．⋯⋯．．⋯．⋯．．⋯⋯．．ii缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯iii1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1磷酸吡哆醇氧化酶与维

7、生素B6代谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2磷酸吡哆醇氧化酶的基本性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3磷酸吡哆醇氧化酶的催化性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．4磷酸吡哆醇氧化酶活性的调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．5磷酸吡哆醇氧化酶的活性位点结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．6赖氨酸乙酰化修饰的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．6．1赖氨酸乙酰化修饰的研究历程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．6．2乙酰基转移酶和去乙酰化酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．101．7研究大肠杆菌磷

8、酸吡哆醇氧化酶的重要意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．1．1菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．122．1．2PCR引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．132．1．3培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．132．2试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．142．2．1试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

9、．．142．2．2常用缓冲液配方⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．142．2．3实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．162．3实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16华中农业大学2013届硕士研究生学位(毕业)论文2．3．1大肠杆菌W3110基因组的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．3．2大肠杆菌质粒的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．172．3．3感受态细胞的制备(CaCl2法)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．3．4从大肠杆菌基因组中扩增pdxH基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

10、⋯⋯⋯⋯182．3．5突变基因的PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．182．3．6酶切反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．3．7连接反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．3．8大肠杆菌的转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．212．3．9重组质粒的筛选、验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．222．3．10蛋白质的大量表达与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯