结直肠癌淋巴结微转移检测的应用现状

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1、结直肠癌淋巴结微转移检测的应用现状李寅翔李俊生(通讯作者)(东南大学医学院210009)【摘要】结肓肠癌是世界上常见的恶性肿瘤，部分常规病理检查认为“无肿瘤转移”的结直肠癌根治术后患者仍因转移而死亡，这表明有肿瘤微转移的存在。而淋巴结微转移则是结直肠癌微转移的最重要途径，因此，准确地检测并判断肿瘤微转移的情况对结直肠癌的临床诊断和治疗有重要的影响。近年来针对结肓肠癌淋巴结微转移的研究有了一定的进展，作者对其检测方法和标志物的应用现状作一综述。【关键词】结直肠癌微转移检测方法综述【中图分类号】R73

2、.37【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)14-0030-02结肓肠癌是世界上第四位最常见的恶性肿瘤，但是在恶性肿瘤引起的死亡患者中居第二位［1］。结直肠癌的死亡率大约为50%,其死亡主要是由转移造成，约20%患者在就诊时已经处于无法切除阶段，存在远处转移(IV期)，还有超过30%的患者在随后的治疗随访过程中再次发牛转移。常规病理的检查存在方法学上的局限性，在无淋巴结转移的I期与II期患者当中，有些其实己经是有转移的III期或者IV期，只是常规的病理学检查未检查到淋巴结的转移

3、而己。说明常规病理无淋巴结转移的pNO患者实际上包含了两类：确实无淋巴结转移；与有淋巴结微转移(micrometastasis)c1微转移的概念及价值1961年，Pickren等⑵提出了“微转移”这一概念,用于描述乳腺癌患者淋巴结中直径<2mm的转移灶。现在，美国癌症联合委员会(AmericanJointCommitteeonCancer,AJCC)将淋巴结转移灶大小介于0.2mm〜2mm者定义为微转移，而肿瘤细胞小于0.2mm者定义为孤立肿瘤细胞(isolatedtumorcells,IT

4、C)［3］。淋巴结微转移是结直肠癌患者的独立预后指标，其对结肓肠患者的生存期以及辅助化疗的应用有明显影响。所以，提高微转移的检测水平至关重要。2结直肠癌微转移的检测方法许多研究者已经使用了先进的方法来提高结直肠癌微转移的检出率。0前临床应用的主要有以下几种：2.1免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)因为肿瘤细胞常会表达与其分化过程及其起源组织相关的标志物，IHC就是利用这种标志物的抗原抗体反应，来对组织内的细胞进行定位，从而提高了微转移检测水平。因为IHC本质上是从细胞

5、学角度检测微转移的，所以阳性结果就意味着肿瘤细胞的存在。IHC方法直接，具有技术简便、特异性强、灵敏度高等优点。虽然此方法己被广大研究人员所采用，但仍然可能会由于遗漏而出现假阳性，因为IHC的切片是抽检，容易出现抽样误差。IHC也有可能因为抗体与基质或炎症出现交叉反应或术中操作不当而出现假阳性。Rosenberg等⑷认为IHC检测出淋巴结内的肿瘤细胞微转移也许是手术时的不当操作所致的医源性污染。因此，应用IHC检测结直肠癌微转移吋，抗体必须有高度的敏感性和特异性。2.2逆转录聚合酶链式反应(rev

6、ersetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)RT-PCR技术是扩增组织或肿瘤特异性的mRNA,使其具有远胜于细胞形态学及IHC技术的敏感性，主要用于检测循环中的肿瘤细胞和实体瘤的微转移,并且可以研究基因表达水平与疾病预后结果的关系。总的来说，应用PCR技术检测结直肠癌微转移具有明显的优势，首先因为mRNA在细胞外很不稳定，所以只要能检测出特异性mRNA就说明存在肿瘤细胞；其次PCR技术易于操作，检测过程相对自动化，只需了解相应的靶基因的序列即可设

7、计出需要的引物；另外将整个淋巴结作DNA或mRNA提取后进行扩增，所得到的样本全而连续，可以有效避免如IHC由于抽样误差导致的假阴性。当然，现今还没有一种完美的微转移检测技术，PCR技术同样会因为操作不当而产生假阴性结果，且由于不能直接见到癌细胞，即使阳性结果也不能确定有活的癌细胞存在。2.1连续切片法(serialsectioning)将要检测的每个淋巴结标本腊块按照常规组织学检查，先以4μm厚度连续切片1或数张，间隔一定距离再连续切片1或数张；或以4μm厚度连续切片直至腊块切完，然

8、后应用HE染色，在光学显微镜下观察。Gusterson[5]应用此方法检查后发现常规病理检查显示无淋巴结转移的患者中，事实上有20%存在微转移。这种法的优点在于方法简单，易于掌握，但因为工作量大、过程繁琐，且阳性率不高，故临床中很少将其作为常规检查。2.2免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)根据抗原抗体反应的原理，先以荧光素标记已知的抗原或抗体制成荧光标记物，再用该荧光标记物作为分子探针标记肿瘤细胞，通过活体示踪和体外荧光显微镜观察标本，从而明确微