海南尖峰岭草药叶下珠没食子酸提取工艺探究

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1、海南尖峰岭草药叶下珠没食子酸提取工艺探究摘要：本研究将采自海南尖峰岭的叶下珠，通过离子化萃取分离法提取了其中的没食子酸。我们在预实验中摸索了没食子酸的提取溶剂和提取方法。采用正交试验的方法，优化了影响没食子酸提取效率的三要素：浸泡时间，提取次数和浸提时间。试验结果表明提取没食子酸的最佳工艺条件是：浸泡1.5小时，抽提3次，浸提时间为2小时，在此条件下没食子酸的提取率最高达0.351%o关键词：提取叶下珠没食子酸中图分类号：G642.0文献标识码：ADOI:10.3969/j.issn.1672-8181.2014

2、.01.040叶下珠，别名珍珠草、珠子草等，为大戟科植物叶下珠(EuphorbiceaceurinariaL)的干燥全草。有关叶下珠的药用价值始载于清朝，可治疗小儿疳眼，疳积等，现在认为叶下珠甘凉，入肝肺二经，平肝清热，利水解毒［1］。通过对叶下珠的化学成分和药理作用的研究表明，叶下珠中的没食子酸具有抗乙肝病毒(HBV)、保肝护肝的作用［1-2］,且其含量较高，是叶下珠的主要有效成分，这一点引起了国内外很大的关注。然而，近年来的研究多聚焦在没食子酸药效上，少关注提取工艺改良，这不利于叶下珠产业的健康发展,本研究对

3、没食子酸的提取工艺进行了多次探索和优化，为进一步高效开发利用没食子酸提供了一些理论依据。1材料与方法1.1材料及设备原料及药品：叶下珠药材（采自海南尖峰岭及海口周边,取之干燥后过60目筛）；95%乙醇为分析纯；磷酸为分析纯;甲醇为色谱纯，蒸馆水为实验室自制；没食子酸对照品（购自SIGMA公司）。仪器：METTLER-TOLEDO电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；Poly-science数显恒温水浴锅（单孔,美国）；高效液相色谱仪（日本岛津制作所）；HP-01真空抽滤机；101-1型干燥箱（中国上海市

4、实验仪器总厂）；Haier电冰箱（青岛海尔股份发有限公司）；Theromsceentific超纯水机（美国）；FZ102微型植物试样粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司）；109号药典检验筛（浙江省上虞县纱筛厂制造）。1.2实验方法1.2.1工艺流程工艺流程大致分为以下步骤：叶下珠药材的精选、粉碎过筛、回流提取、过滤、试品溶液备用。1.2.2提取溶剂的选择没食子酸属有机酸及多酚类物质，在热水、甲醇、乙醇或乙瞇中溶解［3］。经过多种溶剂提取叶下珠的没食子酸的预实验后，本实验选择环保材料水作为提取溶剂。1.2.3提取方法

5、的选择在提取方法的预实验中，我们探索了冷浸法、热回流提取法、超声处理法［3］提取叶下珠的没食子酸，综合考虑各方面因素后，本实验选择冷浸法和热回流提取法。1.2.4对照品溶液的制备取适量没食子酸对照品，用万分之一天平称量，然后加50%甲醇制成25/mL没食子酸对照品溶液。1.2.5供试品溶液的制备取供试品（过60目筛）约4幻精密称量，置于250mL三角瓶中，加水60mL,连接回流冷凝管，加热至沸腾后保持沸腾1小时。冷却后，取下三角瓶，对供试品进行初步过滤,取滤液lmL置于10mL容量瓶中，用50%甲醇定容至10mL

6、刻度,用孔径为0.45的微孔滤膜过滤。1.2.6没食子酸含量的测定本实验采用高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的含量［4］,填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（体积比5：95）；流速为0.9ml/min；检测波长为272nm；进样为10L；柱温为室温［5］,理论板数按没食子酸计算应不低于2000o按照没食子酸吸收峰的峰面积计算供试品中没食子酸的含量。2结果与分析2.1实验结果实验发现，浸泡时间，提取次数，提取时间对没食子酸的得率有较为显著的影响，我们最终对这3个因素作在3个水平(见表1)

7、上进行L9(34)正交试验，测定不同工艺条件下提取液中没食子酸的含量，结果表2,表3,图1,图2：表1正交实验因素水平表2正交试验的安排及结果表3方差分析图1没食子酸标准品图图2没食子酸样品图2.2结果分析通过对表2、表3的结果分析，各因素对提取效果的影响程度分另为A>B>C,其中影响最大的是提取次数，而提取2h后就没有什么变化了。从各因素的参数估计看来，为保证没食子酸完全被提取出来，选择最佳因素水平组合为A3B2Clo3讨论据流行病学调查报告，我国至少有8亿人感染过乙型肝炎，而我国人群中的乙肝表面抗原的携带率高

8、达10%左右，即在我国约有1.3亿人为乙肝病毒携带者，他们中的四分之一最终将发展成慢性肝炎、肝硬化或原发性肝癌。所以，在我国研究开发防治乙型肝炎的药物迫在眉睫。直到目前，研究者对约200种中药材进行防治乙肝的体外、体内研究，只发现了叶下珠（珍珠草）和五倍子对乙肝表面抗原有效［5-6］。现代药理实验证明叶下珠具有极强的抗乙肝病毒和保肝作用，化学药理研究及初步临床观察，也表明