性腺激素对初情大鼠生殖轴上nkb、gnrh和kisspeptin表达的影响

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1、AnhuiAgriculturalUniversityMasterDissertationThesisEffectofGonadalHormonesonExpressionofNeurokininB,GnRHandKisspeptinintheReproductiveAxisofPubertalRatsAnswerer：CuiPeiAdvisor：Prof.LiFu-baoCo-Advisor：Prof.FangFu-guiMajor：ClinicalVeterinaryScienceResearchField：VeterinaryClinicalDiagnosticandTherap

2、euticTechnologyInstitute：CollegeofAnimalScienceandTechnologyAnswerCommitteeChairman：June2014万方数据本项研究受下列基金资助：安徽省自然科学基金项目（1208085MC39）和高等学校博士学科点专项科研基金博导类资助课题（20123418110004）SupportedbyAnhuiProvincialNaturalScienceFoundation(Grant1208085M39),andSpecializedResearchFundfortheDoctoralProgramofHigherEd

3、ucationfromMinistryofEducationScienceandTechnologyDevelopmentCenter,Beijing,P.R.China(Grant20123418110004).万方数据万方数据摘要初情期启动的早与迟直接影响动物的性成熟和以后的繁殖性能，但其机制仍不清楚。研究表明，在动物初情期发育的调控中，下丘脑促性腺激素释放激素（gonadotropinreleasinghormone，GnRH）神经元所分泌的GnRH是初情期启动的决定性因素。一般认为，动物在初情期之前，下丘脑GnRH神经元对性腺类固醇激素的负反馈作用十分敏感，因而在出生后到初情期

4、前这段时间，下丘脑GnRH的分泌因受性腺类固醇激素的作用而一直处于抑制状态，呈现低幅度、低频率的分泌脉冲；初情期的启动始于下丘脑性腺激素抑制机制的解除，但GnRH神经元上并没有性腺激素受体，那么，在性腺激素调节GnRH分泌机制中，应该有对性腺激素敏感的其他中间神经元介导性腺激素对GnRH的调节作用。近期研究发现，神经激肽B（neurokininB，NKB）和Kisspeptin神经元上均有性腺激素受体的表达，二者均能促进GnRH释放和初情期启动。因此，探究动物初情期启动中NKB、Kisspeptin、GnRH和性腺激素受体间的关系尤为重要。目前国内外关于NKB、Kisspeptin和G

5、nRH的研究，多集中于NKB、Kisspeptin和GnRH在不同物种中枢神经系统上的定位和其与初情期的关系的研究，缺少对其在生殖轴上整体的定位研究以及对Kisspeptin、NKB和GnRH与性腺激素水平关系的研究。本试验以皮下埋植性腺激素、卵巢摘除等处理方法，以雌性SD大鼠为研究对象，采用免疫荧光三标技术来观察各个组大鼠生殖轴上NKB、Kisspeptin和GnRH的分布情况，运用ImageJ和Image-proplus6.0软件分别计数和测量各组大鼠生殖轴上NKB、Kisspeptin和GnRH的阳性细胞数和平均荧光强度，并分析其间的关系及变化规律。同时结合实时荧光定量PCR、酶

6、联免疫和放射性免疫等分析方法，来阐述NKB、Kisspeptin和GnRH在机体性腺激素水平改变时的变化及其三者间潜在的联系，为进一步研究NKB、Kisspeptin和GnRH在雌性大鼠生殖功能上的作用及其机制提供科学的理论依据。结果显示：（1）E2（29±0.71d）、E2+P4（28±1.53d）、OVX+E2（30±0.38d）、OVX+E2+NKB（28±1.18d）和OVX+E2+P4+NKB（28±0.52d）组大鼠均比Oil（43±1.38d）组大鼠阴门开启的时间显著提前（P<0.01），且这五组间差异不显著（P>0.05）。（2）NKB主要分布于大鼠下丘脑的弓状核、室旁

7、核和腹内侧核，腺垂体以及卵巢的黄体细胞、卵泡膜、颗粒细胞和间质细胞上，且不同部位表达的荧光强度存在差异（P<0.05）。①大鼠弓状核上的免疫荧光强度显著高于室旁核和腹内侧核（P<0.05）。②卵巢摘除组的大鼠弓状核上NKB阳性神经元数显著高于E2和E2+P4组（P<0.05），大鼠室周核上的NKB阳性细胞数目较少（P<0.05），且仅在OVX+E2+P4+NKB、I万方数据OVX+E2+P4和E2+P4组中分布。③Oil组大鼠下丘脑和腺垂体上的