trap在评价棉花种质资源多样性中的应用研究

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1、新疆农业大学硕士学位论文TRAP在评价棉花种质资源多样性中的应用研究姓名：苗培明申请学位级别：硕士专业：分子生物学与生物化学指导教师：范玲;罗淑萍20080601摘要棉花是世界性的重要的经济作物，在国民经济中占有重要的地位。为提高我国原棉和纺织品在国际市场上的竞争力，急需改善我国原棉品质，尤其需要培育长、强、细兼备的优良棉花品种，以适应国内外市场需求。因此，优异种质资源的创新和鉴定显得极为重要。遗传多样性研究有助于充分开发基因资源的利用潜力，也是收集和保护珍稀基因资源的重要前提。分子生物技术的发展为深入系统评价基因资源遗传多样

2、性提供了更有利的条件。本研究应用目标区域扩增多态性(TargetRegionAmplificationPolymorphism，TRAP)分子标记技术对来自国内外的65份棉花种质资源进行了遗传多样性分析。主要结果如下：1．获得适用于棉花的TRAP--PCR反应体系和反应程序为：反应体系(15“1反应体系)为：48ng模板DNA；0．9mmol／LM92+；dNTPl．26mmol／L；固定引物0．5I，unol／L,随机引物0．1p．mol／L和0．75UTaq酶。反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性45s，35℃退火

3、45s，72℃延伸lmin；5个循环；94"(2变性1min，52。C退火lmin，72。C延伸1min；35个循环，72"C延伸7mim4"C保存。2．对65份棉花材料进行TRAP标记分析的结果表明，被测材料问TRAP标记多态性较高，10个引物共扩增出252条带，其中210条(占83．33％)具有多态性。每对引物平均可扩增出21条多态性。在NTSYS．pcVemion2．11统计分析软件系统中，用UPMGA法进行聚类分析，遗传相似性系数(GS)为0．8431时，65份种质资源可以分为6类。TRAP标记可将其中的61份材料区分

4、开。3．基于TRAP标记数据的聚类结果与材料形态特征和材料地理分布有一定的关系。总的来说，TRAP技术可以为棉花的系统演化和遗传背景的研究提供帮助。4．对于新海16与新海20上出现的特异性条带进行回收克隆测序，4对引物共扩增出5条特异性条带，即T1，T2，T3．1，T3．2与T4。其长度分别为：311bp，126bp，494bp，346bp和292bp。为新海16与新海20的分子鉴定、特别是海陆杂交后代的鉴定和分子辅助选择提供了有效途径。关键词：棉花，目标区域扩增多态性标记，遗传多样性，种质资源，聚类分析ABSTRACTCot

5、tonisallimportantindustrialcropworldwideandplaysallimportantroleinnationaleconomy．Inordertoimprovethequalityofrawcottoninourcountryandcompetitionintheinternationalmarket,itisnecessarytodevelopvarietieswithcombinationofgoodqualityinfibrelength，strengthandmicronaire．T

6、herefore，itisimportanttoinnovateanddetectnewgermplasmresources·Thestudyofgeneticdiversityisbeneficialtothecollectingandprotectingofraregeneresources，aswellastotheexploitationofgeneresources．Thedevelopmentofthe1"1"10lecufarbiotechnologyhasprovidedmoreconvenienceforth

7、efurthersystematicevaluationofgene陀50HFCes·Thisstudyevaluatedthegeneticdiversityof65cotfongermplasmresourcesbyusingTRAP(TargetRegionAmplificationPolymorphism)moleculemarker．Themainresultsare嬲follow：1·Obtained1rI认P—PCRreactionsystemandprogramsutableforcotton．TRAP—PCR

8、reactionsystem：Theamplificationsolution(15p1)wasconsistedof48ngtemplateDNA，0．9mmol／LM92+,1．26mmol／LdNTP,0．5f．tmol／Lfixedprimer．O．Ipm01／Lar