n-（3-三氟甲基苯基）维甲酰胺对人肺腺癌a549细胞分化和骨桥蛋白表达的影响

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2011Jan；46(1)·1·◇基础医学研究◇N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞分化和骨桥蛋白表达的影响程英，王银凤。，桂淑玉，周青，陈飞虎，汪渊摘要目的分析新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物结构的基础上用(3一三氟甲基苯基)-酰胺取代AT—N一(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺(NTFMP)对人肺腺癌细胞株RA分子结构中游离羧基中的．OH而合成，相对分子A549体外增殖、分化及骨桥蛋白表达的影响。方法以人质量为442．54。本实验室先前

2、的研究⋯发现，NT-肺腺癌细胞株A549为研究对象，分别给予不同浓度的AT-FMP能有效地抑制A549细胞增殖、促进凋亡，是否RA及NTFMP进行干预，应用四甲基偶氮唑蓝比色(Mar)能诱导肺癌细胞分化及诱导分化过程中伴随哪些蛋法测定A549细胞的增殖情况；酶动力学法检测该药对A549白变化等均有待进一步研究。本实验在前期工作的细胞分泌癌胚抗原(CEA)的影响；光学显微镜观察A549细基础上，继续研究NTFMP对A549细胞分化的影胞形态变化；Westernblot检测细胞外调节蛋白激酶响，并检测干预前后细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)

3、蛋白及骨桥蛋白(OPN)表达的变化。结果NT—FMP处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而增(ERK)蛋白及骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达的高；10mg／L的NTFMP可明显抑制CEA的分泌；与对照组比变化，探讨NTFMP对人肺腺癌A549细胞的作用及较，细胞数量明显减少，形态由梭形变为不规则形，不重叠，其可能机制。呈单层生长；Westernblot检测显示磷酰化的细胞外调节蛋1材料与方法白激酶(pERK)及OPN在A549细胞内均呈高表达，7．5mg／LNTFMP显著抑制ERK磷酸化和OPN的表达。结论1．1试剂

4、NTFMP由安徽医科大学药学院合成，NTFMP对A549细胞具有促进分化、抑制增殖作用；其机ATRA购自Sigma公司，二者均用二甲基亚砜(DM．制可能与下调A549细胞ERK磷酸化水平及抑制OPN的SO)配制成浓度分别为1、10g／L，分装后于一2Occ表达相关。避光保存，用时稀释1000倍，DMSO的终浓度<主题词肺肿瘤；腺癌；细胞增殖／药物作用；细胞分化／药物1‰；DMEM购于Gibico公司；MTF购自Sigma公司，作用；骨桥蛋白质；癌胚抗原；信号传导分装后置一20℃避光保存；小牛血清购于杭州四季自由词ATRA；N一(3-三氟甲

5、基苯基)维甲酰胺；细胞外调节蛋白激酶青生物工程材料有限公司；鼠抗人OPN、B—actin、羊中图分类号R734．2；R345；R329．2抗人pERK／2、兔抗人ERK／2均购自美国SantaCruz文献标识码A文章编号1000—1492(2011)01—0001—05公司；羊抗鼠、兔抗羊、羊抗兔IgG-HRP、ECL显色试剂盒以及BCA定量试剂盒均购于Pierce公司。N一(3一三氟甲基苯基)维甲酰胺(NTFMP)是全1．2细胞培养人肺腺癌细胞株A549购于美国反式维甲酸(ATRA)的衍生物之一，它是在ATRAATCC，本实验室保存。细

6、胞生长条件为含10％小牛血清的DMEM培养液、37℃、5％CO，、饱和湿度2010—07—28接收的细胞培养箱。0．25％胰蛋白酶消化传代。基金项目：安徽省自然科学基金(编号：090413116)；国家自然科学1．3细胞增殖实验采用MTI"法：选取生长稳定基金(编号：30971226)作者单位：安徽医科大学第一附属医院呼吸内科，合肥230022的3～8代细胞，培养至对数生长期行细胞计数后以安徽医科大学分子生物学实验室、生物化学教研室，安1X10／L细胞密度种于96孔培养板，每孔200Izl，徽省／省部共建教育部重要遗传病基因资源利用和抗炎

7、免贴壁后弃去原液并以去Can、Mg离子的PBS轻轻疫药理重点实验室，合肥230032洗3遍后加入含有NTFMP的培养液，按其终浓度分安徽医科大学药学院，合肥2300321、2．5、5、7．5、10mg／L处理组并设I、5、10mg／L的作者简介：程英，女，硕士研究生；ATRA处理组及细胞对照组、溶剂对照组(1％o的桂淑玉，女，主任医师，硕士生导师，责任作者，E．mail：guishuyu@126．cornDMSO)共1O组，于细胞培养箱中孵育3d后每孔加汪渊，男，教授，博士生导师，责任作者，E．mail：wangyuan入2OlMTF(5

8、L)后置入细胞培养箱温育4h，弃@ahm11．d1．ell去原液，控干，每孔加人100DMSO溶解结晶物，·2·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhu