呼吸道常见致病菌基因芯片检测方法的研究

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1、{IIIillllllllllllllllllll11111111111111111111llllY2409568南开大学学位论文使用授权书根据《南开大学关于研究生学位论文收藏和利用管理办法》，我校的博士、硕士学位获得者均须向南开大学提交本人的学位论文纸质本及相应电子版。本人完全了解南开大学有关研究生学位论文收藏和利用的管理规定。南开大学拥有在《著作权法》规定范围内的学位论文使用权，即：(1)学位获得者必须按规定提交学位论文(包括纸质印刷本及电子版)，学校可以采用影印、缩印或其他复制手段保存研究生学位论文，并编入《南开大学博硕士学位论文全文数据库

2、》；(2)为教学和科研目的，学校可以将公开的学位论文作为资料在图书馆等场所提供校内师生阅读，在校园网上提供论文目录检索、文摘以及论文全文浏览、下载等免费信息服务；(3)根据教育部有关规定，南开大学向教育部指定单位提交公开的学位论文；(4)学位论文作者授权学校向中国科技信息研究所及其万方数据电子出版社和中国学术期刊(光盘)电子出版社提交规定范围的学位论文及其电子版并收入相应学位论文数据库，通过其相关网站对外进行信息服务。同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。非公开学位论文，保密期限内不向外提交和提供服务，解密后提交和服务同公开论文。论文电子版提交至

3、校图书馆网站：http：／／202．113．20．161：8001／index．htm。本人承诺：本人的学位论文是在南开大学学习期间创作完成的作品，并已通过论文答辩；提交的学位论文电子版与纸质本论文的内容一致，如因不同造成不良后果由本人自负。本人同意遵守上述规定。本授权书签署一式两份，由研究生院和图书馆留存。作者暨授权人签字：赵军2013年5月5日南开大学研究生学位论文作者信息论文题目呼吸道常见致病菌基因芯片检测研究姓名赵军学号2120100860答辩日期2013年5月22日论文类别博士口学，万硕士√硕士专业学位口高校教师口同等学力硕士口院／系／

4、所生命科学学院专业微生物学联系电话13821639613Emailjunzhaozi@163．com通信地址(邮编)：天津经济技术开发区宏达街23号1区317备注：是否批准为非公开论文否注：本授权书适用我校授予的所有博士、硕士的学位论文。由作者填写(一式两份)签字后交校图书馆，非公开学位论文须附《南开大学研究生申请非公开学位论文审批表》。南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内

5、容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：壑至2013年5月5日非公开学位论文标注说明(本页表中填写内容须打印)根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明为空白。论文题目申请密级口限制(≤2年)口秘密(≤10年)口机密(≤20年)保密期限20年月日至20年月日审批表编号批准日期20年月日南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效)注：限制★2年(可少于2年)：秘

6、密★10年(可少于10年)：机密★20年(可少于20年)摘要呼吸道感染在人体感染性疾病当中所占比例最多，严重威胁人类的生命健康。随着人类社会的发展，全球变暖、环境污染以及抗生素的广泛使用加剧了微生物的变异性，致使新的致病菌不断出现，同时也引起人类对呼吸道疾病的极大关注。呼吸道疾病多为细菌性感染。如果在发病早期能够快速有效地检测病原菌的种类，为后期的合理用药提供可靠的指导，则能够大大降低呼吸道疾病的死亡率。因此，建立快速、高效的检测体系是非常必要的。本项目针对13种呼吸道常见致病菌大肠杆菌，嗜麦芽糖寡养单胞菌，阴沟肠杆菌，表皮葡萄球菌，溶血葡萄球菌

7、，铜绿假单胞菌，肺炎克雷伯菌，鲍曼不动杆菌，嗜肺军团菌，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌，金黄色葡萄球菌，卡他莫拉菌，选取特异性基因如16SrRNA基因、ITS间区序列、KyFB基因、copB基因等，设计了6对引物和41条探针，此外用检测范围内的菌株、近缘菌株、临床分离株总共90株菌对探针进行筛选，最终得到了能快速检测上述13种菌的基因芯片。该芯片的在基因组水平上的检测的灵敏度为lng／ul；在进行模拟样品试验时，其检测的灵敏度达到103cfu／ml。此次研究利用了多重PCR、两步PCR方法对特异性片段进行扩增与标记，建立了针对6对引物的多重PCR体系。

8、另外，还优化了杂交条件，最终确定杂交温度为46度、杂交时间为16小时，能够得到较好的荧光信号。总之，与传统的方法相比基因芯片灵敏度高、特