玉米tify家族zmjaz4基因的功能验证-abc

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1、玉米TIFY家族ZmJAZ4基因的分析汇报人：李皓洋小组成员：查象敏，晏胜伟，庞伟民报告内容研究背景序列分析翻译后修饰分析后续实验研究背景TIFY家族简介TIFY结构域曾被称为ZIM（Zinc-fingerexpressedininflorescencemeristem）结构域，是植物特有的家族，但在最早的绿藻中并没有此类基因，而只存在于陆生植物中，所以推测TIFY家族是在产生陆生植物时产生的。苔藓被公认为陆生植物的鼻祖，在其中鉴定出两个TIFY成员，这两个成员被分成两个亚群，在拟南芥中已鉴定出18个成员，同样也分为两组

2、，说明在植物进化过程中TIFY家族也不断的发展，并赋予植物更多样化的生理功能和发育机制。TIFY家族成员JAZ蛋白概述JAZ（JASMONATEZIM-DOMAIN）蛋白是JA(茉莉酸)信号通路中的一个重要因子，在拟南芥中JAZ蛋白有12个成员，它们含有三个保守区，分别为NT、TIFY和Jas结构域，其中TIFY结构域包含于ZIM结构域。但是人们仍沿用JAZ、PPD、ZIM和ZML为其命名，因为其命名同其蛋白功能相关。ZIM和ZLM（ZIM-LIKE）是推测的转录因子，含有GATA-锌指结构；JAZs是阻遏蛋白不含DNA结合结构

3、域，并必须依赖蛋白间的互作行使功能(Vanholmeetal.2007b)。PPD类蛋白不能结合DNA，但可以依赖TIFY结构域形成同源或异源二聚体，目前此类蛋白功能未知。人们发现JAZ蛋白可以与其它转录因子结合，从而调控植物生理过程与应激反应，其本身并不是转录因子，而是转录调节因子。本研究对玉米转录因子TIFY家族进行预测，找出玉米特异的TIFY转录因子，结合芯片数据进行分析，确定并克隆得到了玉米胚乳特异表达的JAZs基因。对其进行了功能鉴定：通过蛋白亚细胞定位、激素与胁迫处理等实验阐述他们的响应激素与胁迫的能力，为诠释蛋白功

4、能提供了线索。JAZs由3个结构域组成，分别为N-末端的NT结构域，ZIM结构域和C-末端的Jas结构域，其中ZIM结构域中有保守的TIFY基序。三个结构域都可以与其它因子形成二聚体。其中Jas结构域具有核定位信号使JAZs具有核定位特点。JAZ蛋白与茉莉酸信号通路当植物体处于正常的生理环境时，体内JAs水平很低，JAZs结合MYC2并召集共阻遏蛋白NINJA、TPL抑制JA应答基因的转录；当植物体受到外界刺激或生物和非生物胁迫时，体内产生具有生物活性的JA-Ile激素，并促使COI1与JAZs的结合，形成的SCFCOI1/JA

5、Zs复合体被E3泛素连接酶识别，JAZs进入26S蛋白酶解途径，MYC2被释放从而起动JA应答基因的转录。通过玉米全基因组序列分析，预测了玉米中所有编码转录因子的基因。对所得全部玉米转录因子进行筛选，从中排除掉与水稻、拟南芥蛋白水平同源性高于55%的结果，从而获得了玉米特异的转录因子。其中ZmJAZ4在营养器官中无表达，但在籽粒的胚与胚乳中有表达，并且是随着生育期的进行在胚乳中的表达量持续升高，表达量最高至6000余倍。70006000500040003000ZmJAZ4200010000利用AffymetrixMaizeGen

6、omeArray表达谱芯片检测玉米B73自交系植株的根、茎、叶、茎尖、花丝、雄花以及授粉后10天、15天、20天、25天的胚和胚乳组织中各基因表达情况序列分析序列来源：蛋白序列>lcl

7、GRMZM2G024680_P01seq=translation;coord=1:244770698..244772023:1;parent_transcript=GRMZM2G024680_T01;parent_gene=GRMZM2G024680MAASGNNRFSLTCARLRKFMMEQNRKVRMDDLVGSSSFQRPLQLTPV

8、PVATGPAAAAAWETGTSRTTLPLFPVRTAGTAEITRPEEGKATLTIFYQGQVSTFHHFPADRAKVLMQMASSVTGNTPEKGVAVATAVPKKAQTSDDQPSPAGAGMPPIARKLTLQNFLRKRKNRIAGTDDADRNEDASPWKKRDSAAGAGGTPAGDVPDDASWLALRLBlast多序列比对MEME分析保守结构域亚细胞定位分析WolfPSORT亚细胞定位系统发育分析Protein-proteininteraction酵母双杂交实验ZmJAZ4与TIFY3B、A

9、tMYC2等是否互作。翻译后修饰分析磷酸化:DISPHOS,NetPhos2.0Server泛素化:BDM-PUB,UbPred预测磷酸化位点193位丝氨酸泛素化位点分析泛素化位点137,138,189位赖氨酸后续实验亚细胞定位酵母双杂交转入拟南芥