二甲双胍对膀胱癌增殖的抑制作用及机制研究

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1、万方数据上海交通大学硕士学位论文二甲双胍对膀胱癌增殖的抑制作用及机制研究摘要目的：初步探讨降糖药物二甲双胍对膀胱肿瘤细胞的抑制作用及其相关机制。方法：1.采用CellCountingKit-8（CCK-8）试剂盒分析二甲双胍对膀胱肿瘤细胞增殖的影响；2.应用流式细胞仪检测二甲双胍对细胞周期的影响。3.通过免疫印迹方法检测相关蛋白确定可能参与其中的信号分子；4.裸鼠右侧腋窝皮下接种膀胱癌T24细胞，以建立膀胱癌的裸鼠皮下移植瘤模型；药物处理组将二甲双胍以200mg/kg/day注射裸鼠腹腔内，观察其对裸鼠食量、体重和膀胱癌皮下移植瘤的影响。5.应用免疫组织化学染色法检测膀胱癌皮下移植瘤细胞内

2、Ki67、VEGF、CD31表达的影响。结果：1.在各时间点（24小时，48小时，72小时）二甲双胍处理组与对照组相比膀胱肿瘤细胞的增殖受到明显抑制（P<0.01或P<0.05)；2.与对照组比较，二甲双胍处理组G0/G1期细胞比例上升，S期细胞比例下降（P<0.01或P<0.05)。3.免疫蛋白印迹发现，二甲双胍处理组中的磷酸化AMP激活的蛋白激酶（AMP-activatedproteinkinase,AMPK）表达升高，同时细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达下降(P<0.01或P<0.05)。4.二甲双胍显著抑制膀胱癌皮下移植瘤的生长并减轻瘤重，裸鼠体重和饮食情况并未受到影响；

3、5.二甲双胍处理组移植瘤内Ki67、VEGF和CD31阳性比例较对照组下降。结论：1.体外实验中二甲双胍能够明显抑制膀胱肿瘤细胞的增殖，通过下调cyclinD1的表达诱导细胞周期停滞于G0/G1期。2.体内实验中，二甲双胍抑制膀胱癌移植瘤的生长和成血管作用。这些结果表明二甲双胍可能成为治疗膀胱癌的潜在药物。关键词：二甲双胍；膀胱癌；AMP激活的蛋白激酶；细胞周期；细胞周期蛋白D1；血管内皮生长因子万方数据上海交通大学硕士学位论文万方数据上海交通大学硕士学位论文InhibitionoftheProliferationofBladderCancerCellbyMetforminandtheMe

4、chanismResearchABSTRACTObjective:Toevaluatetheeffectsofmetforminonhumanbladdercancercellanditsunderlyingmechanismsinvitroandinvivo.Methods:1.CellCountingKit-8(CCK-8)wasusedtoinvestigatetheeffectsofmetforminon253JandT24cells’growth;2.Flowcytometrywasusedtoevaluatethecellcyclechangesaftermetformintr

5、eatment;3.Thepossiblesignalingmoleculesinvolvedinthisprocessweredeterminedbyimmunoblotanalysisofvariousproteins;4.Xenografttumormodel：T24cellswereimplantedsubcutaneouslyintotherightaxillaryfossaofnudemicetosetupbladdertumorxenograftmodel．Themetformin-treatgroupwasintra-peritoneallyinjectedmetformi

6、nat200mg/kg/dayfor18daysandthecontrolgroupinjectedintra-peritoneallynormalsalineonly．Themiceweremonitoreddailyforanydiscomfortandweighedeverythirddaytocheckfortumorgrowth;5.Thetumorsexcisedfromnudemicewerefixedin4%paraformaldehydefor24hoursandparaffin-embedded.ImmunohistochemistrystainforKi67,VEGF

7、andCD31.Results:1.In24h,48h,and72h,theproliferationofbladdercancercellswassignificantlyinhibitedcomparedwithcontrolgroup(P<0.01orP<0.05);2.Comparedwithcontrolgroup,asignificantlyincreasewasobservedinthepercentage