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1、第24卷第7期第 三 军 医 大 学 学 报Vol.24,No.78362002年7月ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEJul.2002论著文章编号:100025404(2002)072836204体外人牙髓细胞的连续培养何 飞1,谭颖徽1,杨峥嵘2(12第三军医大学:附属新桥医院口腔科,重庆400037;预防医学系防原医学教研室、全军复合伤研究所,重庆400038) 提 要:目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细
2、胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长,形成细胞结节,并可进一步钙化;与成牙本质细胞相似,它们具有高碱性磷酸酶活性,可合成Ⅰ型胶原,其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征,胞间基质中可见膜被基质小泡,某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化,此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。 关键词:成牙本质细胞;细胞分化;细胞培养 中图法分类
3、号:R322.41;R329.2文献标识码:AConsecutivecultureofhumandentalpulpcellsinvitroHEFei,TANYing2hui,YANGZheng2rong(DepartmentofStomatology,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China)Abstract:ObjectiveTostudyifhumandentalpulpcellscandifferen
4、tiateintoodontoblast2likecellsduringlong2termculture.MethodsThefourthtotenthpassagedhumandentalpulpcellswereculturedupto7,14,21and30d.Thecellswereobservedunderlightmicroscopy(LM),andtransmissionelectronmicroscopy(TEM).Theexpressionofalkalinephosphatasean
5、dtypeⅠcollagenwereassayed.ResultsSomeofthelong2termculturedhumandentalpulpcellsformedmineralizednodules.Theimmunohistochemicalstudyrevealedthat,asodontoblasts,pulpcellscon2tributingtothenodulesformationexpresstypeⅠcollagenandhadsimilarultrastructureasodo
6、ntoblastsunderTEM.ConclusionTheresultssug2gestthatlong2termculturedhumandentalpulpcellhavethecalcificationabilityandcandifferentiateintoodontoblast2likecells.Thislong2termcul2turesystemrepresentsausefulinvitromodelforproliferationanddifferentiationofpulp
7、cellsintoodontoblast2likecellsduringpulpwoundhealing.Keywords:odontoblasts;differentiation;cellculture 牙髓组织损伤修复机制是倍受口腔临床医生和科S2P试剂盒(博士德公司);碱性磷酸酶测定试剂盒(北京中生生研工作者关注的热点问题之一,但由于牙髓被牙体硬物制品公司);1g/LTritonX2100(华美生物工程公司);酶联免疫组织包围,体内研究存在许多困难。多年来许多学者检测仪(Beckman,USA)
8、;胰蛋白酶(Gibco;USA);24孔细胞培养致力于利用组织培养技术建立体内牙髓损伤修复的模板(Gibco,USA);YMT2Z型倒置显微镜(Olympus;Japan);CO2孵箱(QUEUE,USA);YJ2875型超净工作台(苏州净化设备厂)型,探索和揭示牙髓组织活动。近年来,在对鼠、牛及[1,2]1.2 人牙髓细胞的培养人乳牙的牙髓细胞的体外培养及对厚牙齿切片进[3] 选因阻生而拔除的健康恒牙,用组织块法进行原代培养,行牙本质-
