ngf促进再生周围神经血管生成与机制研究

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1、第三军医大学硕士学位论文成的剂量效应，并初步分析了其作用机制。主要结果及结论如下：1．NGF+几丁糖组CD34和vWf阳性染色在术后7、14、30d，都明显比生理盐水组或几丁糖组多，说明NGF具有促再生周围神经中的血管生成作用。它既能促进毛细血管生成，也能促进较大管径血管生成。2．NGF给药后14d比7d的微血管计数和vWf阳性染色有显著增加，也明显多于给药后30d，60d时最少。表明NGF促再生周围神经血管生成具有一定的时间效应，给药后14d是血管生成的高峰期。3．在促进再生坐骨神经中的血管生成时，50ngNGF组即能显

2、著增加CD34和vWf的表达，500ng时表达最强，提示NGF促再生周围神经血管生成作用具有明显的剂量效应。4．NGF+几丁糖组再生周围神经中TrkA、CD34、vWf、VEGF的表达均比几丁糖组显著增加，而且随NGF剂量的增加其表达也明显增加：激光共聚焦和荧光双标观察到VEGF与TrkA、CD34、vWf都有明显共表达：NGF+几丁糖+抗VEGF组CD34的表达被完全抑制，TrkA、vWf的表达也明显减少，提示NGF可能经trkA—VEGF—CD34通路来促进再生周围神经中毛细血管的生成，而促进较大管径血管生成的通路除t

3、rkA—VEGF外，可能还存在其它途径。5．Holmes嗜银染色、常规电镜、CD34和vWf的免疫组化检测提示NGF有明显促进血管生成和轴突纤维再生作用，NGF+几丁糖+抗VEGF组再生轴突纤维和血管生成明显减少；诱发电位检查也证实了NGF的功能修复作用。表明NGF的促周围神经再生与促血管生成作用密切相关，NGF可通过促进VEGF的表达而促进损伤周围神经的再生。关键词：神经生长因子(NGF)血管内皮细胞生长因子(VEGF)；内皮细胞(ECs)血管生成；vWf：大鼠第三军医大学硕士学位论文NGF促进再生周围神经血管生成及机制

4、研究月lJ吾周围神经主要由邻近组织的小血管，神经外膜、内膜及束膜中呈纵行吻合的毛细血管丛供应血液，其具有袢状的微血管丛，侧枝循环丰富。周围神经血供的状态对其损伤后的再生修复具有重要作用：(1)神经损伤后，在神经断端虽然有微循环供血，但神经损伤后常因Wallerian变性，使受损神经的血供发生障碍，造成局部过多的纤维结缔组织增生及瘢痕形成，从而影响轴索延伸。(2)神经再生过程中，雪旺细胞发挥多种生理功能，如分泌神经营养因子，保护受损轴突的神经元：产生促进轴突再生的生长因子，为轴突再生提供营养支持并引导轴突延伸；与再生轴突形成

5、缝隙连接和紧密连接，直接与再生轴突进行物质交换。若血供不足，会影响雪旺氏细胞的存活、增殖，从而影响神经再生修复。(3)神经内微环境的恒定与否，亦影响神经纤维再生，神经内膜液主要来自神经内微血管的液体。微环境的恒定是靠内膜血管和神经束膜血管联合作用来维持的。若受损神经无血供将无法维持神经内微环境的恒定，神经再生也将非常困难。(4)大量实验已证实周围神经局部缺血可致神经纤维溃变，进而使神经纤维的轴浆运输发生障碍，造成神经元胞体与其轴突之间的物质和信息传递中断，从而导致相关神经元胞体发生逆行性变性乃至死亡。由此，如何改善损伤神经

6、的血供对周围神经再生、维持其存活和功能至关重要。NGF是目前为止研究得最清楚的一个神经营养因子，它不仅具有促进发育中的交感和感觉神经元存活和分化，营养成熟的神经元，保护受损的运动神经元，诱导细胞的凋亡，促进痛觉形成等作用，而且近年来，国外报道NGF在大鼠角膜【ll、小鸡胚胎尿囊绒膜[21、缺血的小鼠内收肌【3J等器官或组织中具有血管生成作用。因此，我们推测：如果NGF能促进再生周围神经中的血管生成，那么它将为再生的周围神经供血发挥重要作用，并为其促神经再生作用提供新的证据，也将为血管生成性治疗提供新的思路，为临床上一些缺血

7、性疾病的药物治疗提供新的选择。但对于NGF促进再生周围神经血管生成作用的研究，国内外鲜见报道。血管生成是指在机体生长发育过程中或创伤修复、缺血缺氧和炎症等情况下，原有微血管内皮细胞经过生芽、迁移、增殖及基质重塑等形成新毛细血管的过程，是一个由多种细胞因子和多种细胞成分参与的、动态的、协调的复杂过程。但其起始的中心环节是血管内皮细胞或基质干细胞的迁移、分裂、分化，以及随后的管腔化。NGF第三军医大学硕士学位论文促进血管生成和信号转导机制为当前研究热点。目前有关NGF促血管生成作用及机制尚有诸多问题亟待进一步深入研究，如NGF

8、是否能促进毛细血管的增加即有争议。TurriniP等14I在4、鼠后肢缺血模型研究中发现NGF可以显著地诱导微动脉长度和密度的增加，毛细血管并无显著增加。但EmanueliC等反复将NGF注射入缺血的小鼠内收肌，发现了毛细血管和微动脉密度增加【3I。关于NGF促血管生成的机制研究，EmanueliC等认