一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞实验研究

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1、万方数据江苏大学硕士学位论文MSCSVEGFHGFMMP9ICAM．1HIFlTSCsPONlPDGFBBEPOMMPmesenchymalstemcells间充质干细胞Vascularendothelialgrowth血管内皮生长因子factorhepatocytegrowthfactor肝细胞生长因子Matrixmetalloproteinases9基质金属蛋白酶9Intercellularadhesionmolecule．1细胞间黏附分子1hypoxicinduciblefactor-1tissueste

2、mcellsParaoxonase1，plateletderivedgrowthfactorerythropoietinMatrixmetalloproteinase低氧诱导因子1A骨髓中的组织干细胞对氧磷酶1血小板衍生生长因子BB促红细胞生成素基质蛋白酶家族万方数据江苏大学硕士学位论文目录O引言一、材料与方法1．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．1主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．2常用液体配制1．1．3主要仪器处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5二、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6．．．⋯⋯．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23四参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23本文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30在学期间发表的论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39万方数据江苏大学硕士学位论文引言‘1997年Asahara等首次从成人外周血液中分离出具有分化为血管内皮细胞潜能的前体细胞，并将它命名为内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)I¨。EPCs具有分化为血管内皮细胞的能力，能够增殖、粘附及迁

5、移，并具有形成血管结构的特定能力【2’3】。近年来研究已经证实EPCs在心血管疾病、缺血组织内新生血管形成和组织工程方面具有重要作用，如何有效地分离、培养EPCs以及相关的鉴别方法也引起学者越来越多的重视，本实验采集ICR小鼠骨髓进行EPCs的分离、体外培养及鉴定，为EPCs的进一步研究提供参考。内皮祖细胞(endothelialprogenitorcell，EPC)是一类具有游走特性并能定向增殖分化为成熟血管内皮细胞的前体血管细胞。鉴定EPC主要靠细胞表面标记及细胞生物功能实验，当前公认的细胞表面标记是CDl

6、33+、CD34+、VEGFR一2+【¨。EPC在分化成为内皮细胞时可释放一氧化氮(NO)14J。NO是机体内一种作用广泛的气体信号分子，具有组织修复、降血压、扩血管和抗炎等多种生物学效应15,6】。在NO的生成过程中，内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase，eNOS)是一种关键酶，通过eNOS合成NO进而具有保护器官，减轻损伤的作用【7】。氧自由基(reactiveoxygenspecies，ROS)是一类含氧并具有高反应活性的自由基或分子，氧化应激能引起EPC的数量

7、减少和功能减弱【8】。因此，移植EPC在治疗缺血性血管疾病方面具有一定局限性，包括祖细胞数量不足、NO合成能力不足等问题【9J。本实验将eNOS基因体外转染EPC，检测EPC中eNOS的表达及NO、ROS的含量，旨在探索脂质体介导eNOS基因能否有效转染小鼠EPC，并且能否在EPC中有效表达，为以后解决EPC在治疗血管疾病时表达功能的问题奠定基础，同时也使转染eNOS基因在将来临床基因靶向治疗等方面成为可能。一、材料与方法1．1实验材料1．1．1主要试剂蔓氧化钠fh每化学试剂有限公司)o!鼍羹∥j：l；；’j擘

8、毫∽』j￡?；j：L式弃!j仃f：艮公司)一：1‘一t．o?一、，i，)万方数据江苏大学硕士学位论文乙二胺四乙酸二纳(上海凌峰化学试剂有限公司)十二烷基硫酸钠(天津市盛同鑫化工有限公司)柠檬酸(国药集团化学试剂有限公司)氯磷酸二钠(上海伟进生物科技有限公司)十六烷基三甲基溴化铵(国药集团化学试剂有限公司)噻唑蓝(美匡]Sigma公司)RPMI1640培养液(美国GIBGO公司)苏木精(