黄荆子提取物vb1对人绒毛膜癌细胞增殖、凋亡的影响与其作用机制的研究 (1)

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1、原创性jII明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：迄壅塾日期：型三年三月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同

2、时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：盗鱼塾导师签名主翅垫日期：—!竺年』月望日博士学位论文中文摘要第一章VBl对人绒毛膜癌JEG．3细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨VBl单药和联合5．FU用药对人绒毛膜癌JEG．3细胞增殖和凋亡的影响。方法：1．建立人绒毛膜癌JEG．3细胞培养体系。2．用细胞增殖抑制实验(MTT法)检测细胞增殖：VBl单药：O．1，O．5，1．0，5．0，10．0，20．0，50．09mol／L共7个浓度梯度，并选择24，48，72h为3个时间梯度；5-FU单药：2．5，5．0，10．

3、0，25．0，50．0，100．0，200．099／ml共7个浓度梯度，药物作用时IN48h；VB1联合5-FU．将终浓度为59mol／LVBl分别与不同浓度的5．FU共浴48h，对照组不加药，检测各组相对存活率，计算增殖抑制率。3．平板克隆形成实验检测不同药物处理后各组的克隆形成率。4．不同药物处理后，用Hoechst33258染色观察凋亡形态；流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果：1．不同浓度的VBl(0．1、0．5、1．0、5．0、10．0、20．0、50．0umol／L)分别作用JEG-3细胞后，结果显示随着VBl浓度和作用时间的增加，JEG一3细胞存活率减少(P(0．05)

4、。24h、48h、72小时的IC50分别为博士学位论文中文摘要13．537、5．1’70、1．9261xmol／L。2．48h时5一FU的IC50为25．2571ag／ml，与5pmol／LVBl合用时，IC50为4．078}tg／ml，增效倍数为6．19倍。金氏公式计算q值均大于0．85，提示VBl与5．FU联用具有协同效应。3．不同浓度的VBl作用后，细胞的克隆形成率明显低于对照组。药物浓度越高，克隆形成率越低。VBl联合5．FU用药组的克隆形成率低于两种药物各自单独用药的克隆形成率(尸

5、出现明显的凋亡的多种形态改变；流式细胞仪分析结果显示，各用药组的细胞凋亡率均明显高于对照组(氏O．05)。VBl单独作用JEG-3细胞，凋亡率与药物的浓度正相关(P<0．05)。VBl(5lamol／L)与5-Fu(2509／m1)联合用药组的凋亡率与相同浓度的单独用药组相比均明显增高(氏O．05)。结论：1．VBl在一定的浓度范围内，可以明显抑制JEG．3绒癌细胞的增殖，作用效果是剂量．时间依赖的。2．VBl在一定的浓度范围内能够促进JEG．3绒癌细胞的凋亡，呈剂量依赖性。3．VB1与5-FU合用对JEG．3绒癌细胞的抗肿瘤效果是协同增强的。II博士学位论文中文摘要第二章VBl对

6、人绒毛膜癌JEG．3细胞增殖抑制和诱导凋亡的机制的研究目的：初步探讨VBl对人绒毛膜癌细胞JEG．3抑制增殖和促进凋亡可能的机制。方法：1．RT-PCR检测各浓度组AKT、mTOR、P70S6K的mRNA的表达情况。2．Westemblot检测各浓度组AKT、mTOR、P70S6K及相应磷酸化蛋白的表达情况。3．Westernblot检测各浓度组凋亡相关蛋白的表达情况。结果：1．不同浓度VBl作用JEG．3细胞后AKT、mTOR、P70S6KmRNA的相对表达量均比对照组明显降低；并且在一定程度上呈现剂量依赖关系(尸

7、的升高，JEG．3细胞的AKT、mTOR、P70S6K及相应磷酸化蛋白的相对表达量均比对照组降低，不同浓度组各指标差异均具有显著性(尸