咖啡因通过腺苷受体介导的免疫细胞调节作用减轻小鼠eae的病情

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1、万方数据目录。一缩略词表．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．．．2中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文摘要。。．⋯⋯．。。。。⋯。。。。。．⋯。。．．．。⋯⋯．．⋯．．。。。．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．10材料与方法⋯．⋯⋯．．．⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．13实验动物⋯．⋯⋯．．．．．．．．⋯．．⋯．⋯⋯．．⋯．．⋯13实验试剂⋯．⋯⋯．．．．．．．．⋯．⋯．．⋯⋯．．．．．．．．．．13实验仪器⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．14抗原配置．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．．．．．⋯．．．⋯．．⋯14免疫动物及分

2、组⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14发病情况观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15组织病理学检查．．．．．。。。．．．．⋯．．．．。。．．⋯．．．⋯。。．。．15小胶质细胞免疫组化⋯．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯15细胞因子腺苷受体表达检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16观察结果．⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯．⋯18统计学方法．．．．．⋯．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．⋯．．⋯．．⋯18结果⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．．19实验一⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．．19实验二⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．⋯29实验三⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯

3、．．⋯．．⋯38分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．46小结⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯．．．⋯⋯⋯．．⋯．．⋯52参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53附录⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯57致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯58综述⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．．59独创性声明⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．．．⋯68万方数据温州医学院硕士学位论文缩略词表2万方数据温州I医学院硕士学位论文咖啡因通过腺苷受体介导的免疫细胞调节作用减轻小鼠EAE的病情中文摘要目的：

4、1．不同剂量咖啡因慢性干预作用对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响及其分子免疫学机制。2．不同阶段咖啡因干预作用对小鼠EAE发病的影响。3．咖啡因慢性干预作用对A2aR敲除小鼠EAE的影响，进一步明确咖啡因慢性干预抑链il]EAE发病的作用机理。方法与内容：SPF级C57BL／6d、鼠(野生型及A2aR敲除基因型)小鼠：雌性，8一10周龄，体重16"--209。实验一：野生型小鼠40只，随机分为5组(每组8只)：(DCFA阴性对照组；②EAE阳性对照组，③咖啡因饮水干预组(1mg·kg一，lOmg·kg～，30mg·kg‘1)。所有EAE模型组小鼠用MOG35-5

5、5混合CFA带

6、J成抗原乳剂皮内注射，CFA阴性对照组以生理盐水代替抗原肽制备“抗原乳剂”皮内注射，0、48小时腹腔注射PT造模。咖啡因干预自造模前10天起至EAE造模后第20天与对照组小鼠同期处死为止。自免疫当日定为第0天，每日两次观察并记录动物行为学及体重的变化。采用量化评分法，比较不同咖啡因剂量干预下EAE发病率、潜伏期、症状评分。实验动物处死后取大脑及腰髓组织制作石蜡标本，用H&E染色观察评价中枢炎症细胞浸润和损害程度。同时用逆转录一聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction，RT—PCR)法测定小

7、鼠大脑干扰素一Y(interferon—y，IFN—y)、白介素一17(interleukin一17，IL一17)和转化生长因子p(transforminggrowthfactorB，TGF一13)及腺苷受体(adenosinereceptor，AR)A1R、A2aRmRNA的表达。实验二：野生型小鼠42只，野生型小鼠42只，以EAE免疫当天定为第0天，至免疫后第20天统一处死小鼠。在EAE发病不同阶段分别给予30mg·k91的咖啡因干预：①EAE阳性对照组(10只)，无咖啡因干预；②一10天"---20天全程干预组(8只)，③一10天～0天干预组(8只)，④0天

8、～10天干预组(8只)，⑤10天一-'20天干预组(8只)，OCFA阴性对照组(6只)。EAE带I]模及观察方法同实验一。记万方数据温少I'1医学院硕士学位论文录EAE发病率、潜伏期、症状评分。取大脑和腰髓组织制作石蜡标本，用H&E染色观察评价中枢炎症细胞浸润和损害程度，用免疫组织化学法检测中枢神经系统小胶质细胞的离子钙结合受体分子1(ionizedcalcium—bindingadaptormolecule1，Iba—1)表达。用RT—PCR法测定小鼠IFN—Y、IL一17、TGF一13及A1R、A2aRmRNA的表达。实验三：野生型小鼠20只，A2aR敲除基因

9、型小鼠20