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《atgpx3和atchx23玉米转基因植株获得》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要玉米是我国主要的粮食作物之一。玉米生产常受干旱和盐胁迫的影响，这些胁迫导致玉米大量减产，因此提高玉米的抗旱耐盐性对于保证我国的粮食安全至关重要。随着基因工程技术的发展，利用转基因技术，可以有效改良玉米的抗逆性，获得抗旱和耐盐的新品种。根癌农杆菌介导转化玉米的方法具有转化机理清楚、外源基因低拷贝整合等优点，但该法转化玉米成功率低，其转化效率受到玉米基因型、外植体类型、外植体生长状态、培养基成分、激素成分和配比、农杆菌菌株类型、农杆菌侵染时的浓度、侵染液pH值以及农杆菌侵染后的培养条件等多种因素影响，因此建立遗传稳定性强
2、、转化率高、易于再生的高效转化体系是玉米转基因成功的关键。我们构建了抗旱基因AtGPX3和耐盐基因AtCHX23的转基因载体，以玉米杂交种Hi-Ⅱ和优良自交系郑58和齐319幼胚作为外植体诱导愈伤组织，利用根癌农杆菌介导的转化方法，将AtGPX3和AtCHX23转入愈伤组织中，通过继代、筛选、分化和植株再生等多种步骤，获得了转基因苗，进一步利用叶片涂抹抗生素PPT和PCR方法，鉴定得到了转基因阳性苗，已得到了Hi-Ⅱ转基因种子。同时，我们诱导获得了郑58和齐319等优良自交系的愈伤组织并转化AtGPX3和AtCHX23基
3、因，获得了的转基因植物。对转基因体系进行优化，发现以D培养基为基础培养基，添加L-谷氨酰胺可有效提高郑58胚性愈伤组织的诱导率。另外，农杆菌转化后，在后期筛选过程中，抑制农杆菌的繁殖，对抗性愈伤的再生具有积极作用，本实验优化了抑菌方法，即在不降低转化效率的前提下，使用较低的侵染液浓度（OD600=0.3-0.4），较短的侵染时间（5min左右）以及多次清洗愈伤组织和延长抗生素浸泡愈伤组织时间（60min）等方法，可有效抑制农杆菌的繁殖，提高转基因效率。关键词：玉米，根癌农杆菌介导法，Hi-Ⅱ，郑58，齐319IIIABS
4、TRACTMaizeisoneofthemaingraincropsinourcountry.Maizeproductivityisoftenadverselyaffectedbydroughtandsaltstresses,whichcansignificantlydecreasetheyieldofZeamayplants.Therefore,itisessentialtoimprovedroughtandsalttoleranceofmaizeplantsforfoodsecurityofourcountry.Wi
5、ththedevelopmentofgeneticengineeringtechniques,peoplecanusethetransgenictechnologytoeffectivelyimprovestresstoleranceofmaizeandobtaindroughtandsaltresistantnewmaizevarieties.TheAgrobacterium-mediatedtransgenicmethodinmaizehasmanyadvantagesoverothergenetransformat
6、ionmethods,forexamplecleartransformationmechanisms,ahighfrequencyofsingleorlowcopyinsertioneventsetal.However,thetransformationefficiencyusingAgrobacteriuminmaizeisrelativelylow.Theefficiencyismarkedlyinfluencedbymanyfactorsincludingmaizegenotype,explanttype,expl
7、antgrowthstate,mediumcomposition,hormonecompositionandratio,typeofAgrobacteriumstrains,concentrationandpHofinfectionsolution,andthecultureconditionsafterinfectionandsoon.Hence,establishinganeffectivetransgenictransformationsystemwithstableheredity,highinfectionra
8、te,easyandefficientmaizeregenerationmethodisakeystepforobtainingtransgenicmaizeplants.WeconstructedtwotransformationvectorsharbouringdroughttolerancegeneAtGPX3
