sars-cov刺突蛋白融合蛋白在哺乳动物细胞中高量表达纯化及功能的研究

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1、中国医学科学院中国协和医科人学硕上研究生毕业论文图表目录图1S基因及其片段插入表达载体后酶切鉴定结果的DNA电泳图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43图2用WesternBlotting的方法确定S融合蛋白及其片段在宿主细胞中正确表达⋯⋯⋯45图3纯化后的融合蛋白S1190Fe聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色的结果⋯⋯⋯⋯⋯．，46图4融合蛋白S1190Fc在4"C结合VeroE6细胞的流式结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47图5融合蛋白S1190Fc与转染了hACE2的293E细胞结合的流式结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47图6融合

2、蛋白S1190Fc与转染了mACE2的293E细胞结合的流式结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48图7S1190Fc与ACE2受体的免疫共沉淀(IP)的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59图8用培养细胞做ACE2受体下调实验的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60图9用培养细胞做ACE2受体下调实验的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l图10细胞融合实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。62图1l野生型小鼠肺部酸或盐吸入并加注融合蛋白S1190Fc的肺弹回率变化⋯⋯⋯⋯⋯63图12野

3、生型小鼠肺部酸或盐吸入加注融合蛋白S1190Fc或$318—510Fc肺弹回率变化．．64图13小鼠肺组织病理切片⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65图14检测融合蛋白S1190Fc的肺免疫组化结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67图15肺组织ACE2蛋白表达量下降⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．68图16用SpeI和HindⅢ酶切质粒构建前后的凝胶电泳图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93图17用AvrII酶切质粒并回收后的DNA凝胶电泳圈⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、94图18筛选出的第一株细胞加入不同浓度的ATRA后的细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯96图19筛选出的第二株细胞加入不同浓度的ATRA后的细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯96图20筛选出的细胞株加入ATRA前后的荧光变化照片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯97图2I细胞株A的剂量效应曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯100图22回归直线及回归方程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101图23加入萃取液72h后的可见光与绿色荧光照片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102图24筛选出

5、的阳性化合物的可见光与绿色荧光照片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯104图25药物筛选细胞模型的可见光与绿色荧光照片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯110图26药筛模型的剂量效应曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112图27回归直线及回归方程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112图28PMA刺激细胞72小时后，细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113图29PAMAMG5刺激细胞72小时后，细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113图30PAMAMG7刺

6、激细胞72小时后，细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114图31PAMAMG9刺激细胞72小时后，细胞绿色荧光的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114图32PAMAMG3刺激细胞5天后，细胞状态的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．115图33PAMAMG3肌肉注射后肝脏的病理改变(200x)一图34PAMAMG3肌肉注射后肝脏的病理改变(200x)一图35PAMAMG3肌肉注射后肝脏的病理改变(400x)．．图36PAMAMG3肌肉注射后肾脏的病理改变(400x)～图37PAMAMG3肌肉注射后肾脏的病理

7、改变(400x)．．图38PAMAMG3肌肉注射后小肠的病理改变(100x)．．图39PAMAMG3肌肉注射后小肠的病理改变(400x)．．．7．6789；}1中国医学科学院中国协和医科人学硕士研究生毕业论文图40PAMAMG3肌肉注射后注射部位的退行性病变(200×)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯120图41PAMAMG3肌肉注射后注射部位的退行性改变(400×)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121表1人体高表达基因中密码子使用频率比例表2肺损伤评分结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．表3每孔的三个随机读数及均值⋯⋯⋯⋯⋯表4三个平

8、行样品均值及标准差⋯⋯⋯⋯⋯表5线性范围内的ATRA的浓度及读数均值表6三个平行样品读数均值及标准差⋯⋯⋯珈局册啪mⅢ中国医学科学院中国协和医科大学碗上研究生毕业论文中文摘要SARS．CoV刺突蛋白的融合蛋白在哺乳动物细胞中的高量表达纯化及功能研究论文摘要：导致严重急性呼吸综合征(SARS)世界性爆发流行的病原体是一种新型的冠状病毒SARS冠状病毒(sARs—CoV)。SARS是一种以呼吸系统症状为主要表现的全身