杜仲叶抗疲劳活性成分的分离纯化与结构鉴定

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1、杜仲叶抗疲劳活性成分的分离纯化及结构鉴定摘要杜仲(EueommiaUlmoides)是我国特有经济林木，是一种名贵中药材。杜仲味甘、性温，具有很好的降血压、补肾、益肝、强筋骨及安胎等功效，常以皮入药。研究证明杜仲叶和杜仲皮中的生物功效成分大体一致，很多研究人员对杜仲叶提取物的抗疲劳功效进行了研究，初步研究表明杜仲叶的提取物具有一定的抗疲劳功效。目前，杜仲叶抗疲劳生物功效成分和作用机理的研究只是停留在表面(功效成分不清楚，作用机理不明确)，因此对杜仲叶提取物的抗疲劳功效成分进一步探索具有很重要的意义。本文采取溶剂提取和超声波辅助提取方法对杜仲叶生物功效成分进行提取，并通过大孔树脂分离、溶剂萃取

2、、薄层层析和硅胶柱层析等方法对杜仲叶粗提物进行分离纯化。最后，采用紫外、红外等手段对纯化产品进行结构鉴定。杜仲叶成分提取、分离和纯化的过程中，同步进行小鼠抗疲劳试验，从而对杜仲叶中抗疲劳等生物功效成分进行跟踪并确定，为以杜仲叶为原料的研究和应用提供合理、科学依据。本论文完成的研究内容如下：(1)考察了杜仲叶提取各因素对黄酮类化合物得率和多酚得率的影响，通过正交试验得到黄酮类化合物最佳提取工艺为：超声波功率600W，超声波时间30min，乙醇浓度60％，料液比1：15，提取两次，在最佳条件下总黄酮得率为2．04％；得到多酚最佳提取工艺为：超声波功率800W，超声波提取时间60min，乙醇浓度4

3、0％，料液比1：10的条件下提取两次，多酚得率为O．175％。(2)杜仲叶提取物对自由基(DPPH-)清除作用大小顺序为：95％乙醇提取物>甲醇提取物>乙酸乙酯提取物>丙酮提取物；不同浓度乙醇的杜仲叶提取物对自由基(DPPH·)清除率大小顺序为：60％>95％>30％(乙醇提取物)；60％乙醇提取物经大孔树脂吸附后，不同浓度乙醇洗脱组分清除率大小顺序为60％>90％>30％(乙醇洗脱物)。(3)小鼠抗疲劳试验表明，杜仲叶经过提取、分离和纯化后得到的黄酮类化合物能有效延长小鼠负重游泳时间，能增加小鼠运动后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量；得到绿原酸不能延长

4、小鼠负重游泳时间，能增加小鼠运动后的血清LD，降低血清BUN，增加血清LDH活性，降低肝糖原和肌糖原含量。(4)小鼠耐缺氧试验表明，杜仲叶经过提取、分离和纯化后得到的黄酮类化合物和绿原酸都具有耐缺氧功能，且黄酮类化合物较绿原酸效果好。(5)体内抗氧化试验表明，杜仲叶经过提取、分离和纯化后得到的黄酮类化合物能增311d,鼠运动后血清MDA含量，增加T-SOD活力，增强血清GSH—PX活力O，得到的绿原酸减少小鼠运动后血清MDA含量，降低T-SOD活力，增强血清GSH．PX活力。(6)杜仲叶经提取、分离和纯化得到四个单体化合物，采用紫外、红外等方法对其进行了结构初步鉴定。关键词：杜仲叶，有效成分

5、，抗疲劳，分离纯化，结构鉴定UTHEPURIFICATIoNANDSTRUCTUREIDENTIFICATIoNoFANTI—FATIGUEDACTIVEINGREDIENTSFRoMEUCOMMIALEAVESABSTRACTEucommiaUlmoidesiSakindofspecialplantinChina，itiSalsoararemedicine．ManyeffectsofEucommiaUlmoideshasbeenstudied，suchasloweringbloodpressure，tonifyingkidney,salutarytoliver,strengtheningi

6、ngtendonsandbones，goodtotocolysis，etc．Studyshowsthattheeffectivecompoundsofleaveshavenodistinctionwithbarksgenerally,ithasbeenindicatedbylotsofresearchersthattheextractofEucommiaUlmoidesleaveshastheanti．fatiguefunction．Buttheactiveingredientsandtheanti-fatiguemechanismareindeterminate，anditWasveryi

7、nterestingtostudytheEucommiaUlmoidesleavesanditsactiveingredientswithanti-fatiguefunction．nisstudyaimstoobtaintheeffectivecompoundsoftheEucommiaUlmoides1eavesbysolventextractionandultrasonicassistedextracti