机械牵张力诱导低表达cbfa1基因的人牙周膜细胞成骨分化基因调控机制的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文缩略语表缩略语英文全称中文全称ALPAlkalinephospatase碱性磷酸酶BGLAPOsteocalcin骨钙素/OCNBMPBonemorphogenicprotein骨形成蛋白bpBasepair碱基对BSPBonesialoprotein骨涎蛋白Cbfa1corebindingfactoralpha1核心结合因子1CollagenCollagentypeⅠⅠ型胶原ⅠcDNAComplementaryDNA互补DNACOLCollagen胶原DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMEMDulbecc

2、o’smodifiedeaglemediumDMEM培养基DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜ECMExtracellularmatrix细胞外基质FBSFetalbovineserum胎牛血清FNFibronectin纤维连接蛋白HoxgeneHomeoboxgene同源盒基因IGFInsulin-likegrowthfactor胰岛素样生长因子RNAiRNAinterferenceRNA干扰RnasinRNaseinhibitorRNA酶抑制剂RNARibonucleicacid核糖核酸LPRLinearPolymeraseReactio

3、n线性聚合酶反应MSX1Musclesegmenthomeoboxgene同源异形盒基因mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸-1-独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者

4、签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文机械牵张力诱导低表达Cbfa1基因的人牙周膜细胞成骨分化相关基因调控机制的研究硕士研究生：夜文敏导师：段银钟教授第四军医

5、大学口腔医学院，西安，710032中文摘要牙周膜成纤维细胞（PDLF）是牙周膜组织中数量最多，功能最重要的细胞。牙周膜细胞是一种具有多向分化功能的群体细胞，在发育过程和生理应力作用下，部分细胞会分化为成骨细胞、成牙骨质细胞。牙周膜细胞具有趋化、粘附、增生、生物合成和形成矿化组织等多项生物学功能。这些功能受许多正、负调节因素的影响，其中机械力是一种重要的影响细胞结构和功能的外界刺激因子。机械力对牙周改建作用影响较大，其对于牙周膜细胞生物学特性的影响近年来受到学者的广泛关注，以往研究表明牙周膜细胞具有成骨样细胞表型特征，在机械力作用下可以向成骨细胞或成牙骨质细胞

6、分化，还有研究表明机械力可以调节牙周膜细胞生物学特性，影响细胞外基质代谢，诱导牙周膜细胞向成骨细胞分化。RNAi（RNAinterference）即RNA干扰，是近几年发展起来的一种研究基因功能的新方法，是一种双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）诱发的基因沉默（genesilencing），在此过程中，与双链RNA有同源序列的信使RNA（mRNA）被高效特异性的降解，从而抑制该基因的表达。由于RNAi技术可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段

7、。-3-第四军医大学硕士学位论文目前有关机械力调控细胞分化的分子机制尚未十分明确，但可以肯定的是一些生物分子在时间、空间、活性强度等方面有序的协调作用决定了牙周组织改建的进程，如生长因子和相关蛋白、细胞外基质、转录因子、细胞膜表面成分和粘附分子等。细胞体外培养技术与分子生物学技术的发展为进一步深入研究该机制奠定了基础。本研究首先设计针对Cbfa1基因编码区的寡核苷酸链，体外退火后克隆入经双酶切线性化的小干扰载体mU6中，对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。以脂质体法将mU6空载体和重组质粒分别导入hPDLCs细胞系。用含G418的培养液筛选，挑取阳性克隆

8、后用RT-PCR技术检测各人牙周膜细胞克隆内Cbfa