沙丁胺醇对大鼠气道平滑肌细胞致敏状态下eotaxin表达的影响与机制探讨

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1、k^，▲徐州医学院硕士学位论文幽JIJllJr,llJ／JIllIIIJIJfJll1JtlJJU1．,,,it,,i,l,,i,iflflrlff，,INfffillY1844959缩略词ASMCCCR3缩略词表Abbreviation英文全称airwaysmoothmusclecelleosinophilicchemotacticfactorreceptor3cAMPcyclicadenosinemonophosphatecDNAcomplementarydeoxyribonucleicacidDMEMdulbecco’smodifiedeagle’SmediumD

2、XMdexamethasoneELISAenzyme—linkedimmunosorbentassayEOSeosinophileEotaxineosinophilicchemotacticfactorGCglucocorticoidHEhematoxylin-eosinIL—13interleukin．13PBSphosphate-bufferedsalineRT-PCRreversetranscriptionandpolymerasechainreaction中文全称气道平滑肌细胞嗜酸粒细胞趋化因子受体3环磷酸腺苷互补脱氧核糖核酸达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基

3、地塞米松酶联免疫吸附测定嗜酸性粒细胞嗜酸粒细胞趋化因子糖皮质激素苏木素．伊红白细胞介素．13磷酸盐缓冲液逆转录聚合酶链反应～◆、r-●I徐州医学院硕士学位论文沙丁胺醇对大鼠气道平滑肌细胞致敏状态下Eotaxin表达的影响及机制探讨中文摘要目的通过观察体外大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)在致敏状态下对嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的表达及沙丁胺醇对其表达的影响，探讨气道平滑肌细胞对哮喘气道炎症的影响及可能的作用机制。方法6只清洁级雌性SD大鼠于第1、8d给予OVA混悬液【含OVA25gg(V级)+A1(OH)3lmg]1mL腹腔注射致敏，第15～19d将大鼠置于密闭

4、25cnlx15ctnx15till自制雾化箱中，雾化吸入2％OVA，每天1次，每次30min。末次雾化激发4h后麻醉大鼠、采集血液，离心后收集血清备用。贴壁法体外培养大鼠气道平滑肌细胞，培养的大鼠ASMC经形态学和免疫组化方法鉴定，实验选用第4~6代细胞。实验分为6组：A组(致敏对照组)，细胞中加入致敏血清；B组(沙丁胺醇组)，细胞中同时加入致敏血清及沙丁胺醇；C组(地塞米松组)，细胞中同时加入致敏血清及地塞米松；D组(联合治疗组)，细胞中同时加入致敏血清及沙丁胺醇和地塞米松；E组(致敏血清组)，仅在生理盐水中加入致敏血清；F组(正常对照组)，细胞中加入胎牛血清。各组

5、所加入致敏血清来自于之前收集的哮喘动物模型，加入比例为10％；加入沙丁胺醇终浓度为109M，加入地塞米松终浓度为1laM。各组细胞样本培养6h后收集培养液，离心后吸取上清分装于EP管中，按照试剂盒说明，以酶联免疫吸附法测定上清中Eotaxin水平；用逆转录聚合酶链反应(R工PCR)法测定各组大鼠培养细胞内EotaxinmRNA的表达强度；放射免疫法测定细胞内cAMP含量。2卜▲●～，●、徐州医学院硕士学位论文●士窭亭日术1．大鼠气道平滑肌细胞的鉴定i细胞呈条形或梭形，胞质丰富核仁清晰，细胞间平行排列，密度适中。a．actin免疫细胞化学染色：高倍视野镜下，可见胞浆内a．

6、actin绿色荧光，呈丝状平行均匀分布。2．细胞内EotaxinmRNA水平表达相对光密谋值及cAMP含量测定：A组分别为(1．3909-a：0．0411)ng／L、(17．5825+3．6233)ng／L；B组分别为(0．74734-0．0764)ng／L、(76．68354-1．1825)ng／L；C组分别为(O．77274-0．1895)ng／L、(58．98924-5．9366)ng／L；D组分别为(O．56974-0．0954)ng／L、(94．07434-4．6388)rig／L；E组分别为(O．18594-0．0391)ng／L、(9．61404-0．61

7、08)ng／L；F组分别为(0．04904-0．0094)ng／L、(32．39374-3．3600)ng／L。与正常对照组比较，各组中EotaxinmRNA水平均升高(P