杆状病毒me53基因功能的研究及豉甲科分子系统发育的分析

《杆状病毒me53基因功能的研究及豉甲科分子系统发育的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中山大学博士沦文杆状病毒111e53基因功能研究及鼓甲科分子系统发育分析习欠云杆状病毒me53基因的功能研究及豉甲科的分子系统发育分析习欠云导师：王殉章教授专业：生物化学与分子生物学摘要在昆虫生物防治中，杆状病毒作为无害、安全生物杀虫剂已经成为了世界各国的研究热点，而昆虫的系统分类对认识和防治昆虫也具有重要意义。本论文分为两个部分，第一部分关于昆虫杆状病毒基因功能的研究：“杆状病毒早期转录因子me53基因的功能研究”；第二部分是利用生物信息学方法为昆虫分类提供了一一个有效的途径：“豉甲科(鞘翅目)的分子系统发育分析”。第一部分对昆虫苜

2、蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)的me53基因进行了功能研究。该基因是一个起调控作用的早期转录因子，它的功能仍在探究之中。为了研究其在病毒感染过程中的作用，本文通过同源重组的方法构建了敲除me53基因的缺失型病毒。GFP表达分析结果显示me53基因缺失型病毒不能产生病毒粒子，质粒转染上清感染试验进一步证实me53基因缺失型病毒不能产生二次感染，即不能产生出芽型(BV)粒子。电镜观察支持Tme53基因缺失型病毒不能形成核衣壳而导致出芽型(Bv)和包涵体型(ODV)病毒的缺失。基于SYBR绿色荧光实时定量PCR的结果表明me53基

3、因缺失型病毒的DNA复制受到中山大学博士论文奸状病毒me53基因功能研究及鼓甲嗣分子系绞发育分析习欠云显著的阻止，而me53基因补回型病毒则表现了与野生型病毒相同的特性，说明me53基因缺失型病毒的表型确实由于me53基因的缺失所引起的。因此，敲除me53基因的一系列实验结果表明me53基因是一个病毒复制的必需基因，也为病毒DNA复制所必需。第二部分根据位点特异性模型，利用PAUP和MrBayes软件，首次对部分线粒体COl基因序列三个密码子位置的数据模块分别进行了豉甲科及水生肉食亚目在亚科或科水平上的系统发育学分析，结果表明第二密码

4、子数据模块获得了理想的分析结果。由PAuP生成的最优树来自第二密码子数据模块的分析，而由MrBayes生成的最优树来自全部密码子数据模块的分析。此外，用对应的氨基酸序列生成的ME和MP树与第二密码子数据模块分析的结果一致。在代表豉甲科三个亚科的13个种中，根据核苷酸及对应的氨基酸序列，用PAUP和MrBayes生成了多个最优树中，亚科Orectochilinae和Gyrininae以高的支持率形成了单系。然而，来自亚科Enhydrinae的种Porrorhynchuslandaisilandaisi呈现了异常的位置。SH检验结果也证实

5、了这种异常位置的可信性。表明这个种可能代表了一个科。对37个序列数据矩阵，在来自第二密码子数据模块的最优ML树中，如果不考虑种Porrorhynchuslanda&ilandaisi，豉甲科位于树的基部，表明了该科在水生肉食亚目(Hydradephaga)r和是一个早期的分支。Hydradephaga呈现为一单系。在树中产生了一个单系的Dytiscoidea总科，由Dytiscidae、Hygrobiidae、Noteridae和Amphizoidae四个科组成，并且这四个科也均成为单系。单系的Haliplidae与之成为姐妹群。该树

6、也显示了多起源假说的特性，多起源假说认为Hydradephaga是由三个独立的起源过渡到水生环境的。这个矛盾的结论正好说明了Hydradephaga是来自‘个陆生祖先，而这些现代水生种类可能是来自陆生祖先的三个分支。此外线粒体分了钟的结果表明豉甲科的5对相近种间的分化是一个短时期内发生的(O．01一】．81百万年前)，这点可能与它们的特殊地理分布有关。关键词：AcMNPV；me53基因；病毒复制；病毒DNA复制；豉甲科；系统发育学关系；水生肉食亚目；密码子数据模块中山大学博士论j=杆牡病毒me53基因功能研究_硬鼓甲科分子系统发育分析

7、习欠云ThestudyoffunctiononAcMNPVme53geneandSystematicanalysisofGyrinidae(Coleoptera)basedonmitochondrialCOIgeneQian—YunXiSupervisor：ProfessorXun—zhangWangMajor：BiochemistryandMolecularBiologyAbstFaCtAsasafeinsecticide．baculovirushasbeenafocusotworldwideresearchmthebiocontr

8、olofinsect．Insectclassificationisimportantforbiocontrol+Thisdissertationispresentedinthefollowingtwoparts：‘‘Ch