可降解plga2fplla多通道支架联合雪旺细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

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1、华中科技大学博士学位论文PLGA/PLLA新型结构多通道人工支架材料联合SCs移植修复脊髓损伤的实验研究中文摘要第一部分:原代大鼠雪旺细胞的体外培养目的：研究在使用雪旺细胞作为种子细胞联合组织工程技术修复脊髓损伤的过程中，体外培养纯化及增殖雪旺细胞的方法。方法：取一周内新生SD大鼠的双侧坐骨神经，仔细去除神经外膜后，采用经双消化酶短时间消化后的组织块反复植块，并应用Ara-C和G418抑制成纤维细胞生长，以b-FGF刺激SC增殖，S-100蛋白免疫组化法鉴定，观察其生长并绘制生长曲线，按照细胞倍增时间公式计算

2、其倍增时间。结果：通过上述原代雪旺细胞培养方法能够明显抑制成纤维细胞的生长，得到大量高纯度雪旺细胞，经S-100蛋白免疫组化鉴定，雪旺细胞纯度达96％以上。结论：本培养方法能够获得大量高纯度的雪旺细胞，为种子细胞联合组织工程技术修复神经缺损的实验研究提供了可靠的细胞来源。关键词：雪旺细胞;培养;碱性成纤维细胞生长因子第二部分：新型多通道管道支架的研制与SCs生物相容性研究目的:将雪旺细胞移植到PLGA/PLLA多通道支架材料中，考察雪旺细胞在支架中的粘附、增殖和迁移，评价细胞和支架的生物相容性。4华中科技大学

3、博士学位论文方法：将雪旺细胞种植在PLGA/PLLA多通道支架中，继续培养7d和14d，用MTT法比较细胞在支架中不同时期的生长活力，Viability/CytotoxicityAssayKit检测细胞活性，光镜观察细胞形态和S-100蛋白免疫鉴定细胞的迁移状况。结果:雪旺细胞在多管道支架中于7d和14d均表现出良好的粘附、增殖及活性。并能在14d迁移到支架的空泡结构中。结论：雪旺细胞和PLGA/PLLA多管道支架之间具有良好的生物相容性。第三部分:多通道支架和大鼠脊髓生物相容性的研究目的:研究PLGA/PL

4、LA多管道支架和脊髓的生物相容性。方法：把PLGA/PLLA多管道支架植入大鼠脊髓完全横断模型中，桥接损伤脊髓两端。2周和6周后用免疫组化方法评价脊髓对支架的异物反应情况及支架中想细胞浸入情况。结果：2周和6周后，脊髓和支架结合良好。星形胶质细胞很难进入支架，巨噬细胞浸入量很少。S-100阳性细胞浸入靠近支架。纤维细胞成线性长入管道腔。结论：多通道支架和脊髓的生物相容很好，支架限制了瘢痕的形成，并诱导长入细胞有序生长。第四部分：多管道支架联合雪旺细胞移植修复脊髓损伤的研究5华中科技大学博士学位论文目的：研究P

5、LGA/PLLA多通道支架联合雪旺细胞（SCs）移植对SD大鼠脊髓损伤的修复作用。方法:原代培养新生SD大鼠雪旺细胞并建立脊髓损伤动物模型，将PLGA/PLLA多管道支架和SCs植入脊髓损伤处（实验组），并设立单纯支架植入组为实验对照，脊髓损伤+DMEM-F12培养基注射组为空白对照组。术后每周评估大鼠后肢运动功能恢复情况，分别于8周取材进行组织学观察。结果：各个实验组的大鼠在术后第8周后肢运动功能都得到一定的恢复，再生的轴突长入支架管道。实验组的实验结果好于实验对照组。结论:新型PLGA/PLLA多管道支架

6、能够为轴突再生提供依托，联合雪旺细胞移植后具有促进脊髓损伤后神经再生和运动功能恢复的修复作用6华中科技大学博士学位论文AbstractPartI:PrimarycultivationandpurificationofSchwanncellsinVitroobjective:TofoundaneffectiveapproachtoobtainmorepopulationandmorepurificationofSCs(Schwanncells)fromSDratsandpromoteSCsgrowingonbi

7、omaterialscaffoldstorepairspinalcord.Method:BilateralsciaticnerveswerecollectedfromneonateSDrats3anddivestedfromperineurium.Then，thenerveswerecutinto1mmtissuepieces.Twoenzymeswereusedtodigestthesciaticnervespeciments.Ara-CandGeneticinwereusedtoinhibitfibrob

8、lastsgrowing.b-FGFpromoteSCstoproliferate.Thenweadoptedmorphologyobservation,S-100proteinassessment.Result:Mostoffibroblastswerekilledbytheco-effectofAra-CandG418.ByS100stainingwefoundthatweyieldedupov