在高羊茅（festuca+arundinacea+schreb.）中利用基因枪法转化osisap1基因的研究

《在高羊茅（festuca+arundinacea+schreb.）中利用基因枪法转化osisap1基因的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要逆境胁迫是对植物生存的一个严重威胁，植物面对逆境胁迫有其自身的应答调节机制。分子生物学的发展以及生物技术的应用，为人们研究植物的抗逆分子机理提供了理论依据和研究方法。目前人们已经发现了许多与逆境胁迫相关的基因，通过基因二[程的办法，过量表达这些基因，使转基因植株增强了对逆境的抗性。高羊茅(FestucaarundinaceaSchreb．)是一种倍受青睐的优质草坪草，高羊茅的育种一直是人们研究的热点，本实验旨在借助基因工程技术，转入一个调控基因，使其在高羊茅中过量表达，以期待获得抗逆性增强的转基因高羊茅植株。实验克隆了粳稻(Oryzas

2、alivasub．)秋光的锌指蛋白OSISAPl基因，构建不同标记的两个植物表达载体，一个载体是pGreen0229．CaMV35S．OSISAPl．DHA，DHA标记便于免疫印迹的检测，另一个载体是pGreen0229一CaMV35S．OSISAPl．GFP,GFP标记可用于检测绿色荧光，经测序和酶切验证，获得正确的植物表达载体。植物材料采用高羊茅品种交战II号，实验建立了高羊茅下胚轴诱导胚性愈伤组织及其再生体系。以基因枪法转化高羊茅胚性愈伤组织，除草剂草丁膦(2rag·L-1PPn筛选转化的愈伤组织，最终获得再生植株156个。经PCR检

3、测，有26个转DHA标记载体的阳性植株，有37个转GFP标记载体的阳性植株，并且叶片涂抹PPT(2mg·L1PPl)，转基因叶片有明显的除草剂抗性。免疫印迹杂交检测到目的蛋白杂交条带很微弱，激光共聚焦显微镜检测到明显的绿色荧光，绿荧光蛋白的存在说明目的基因已经整合到高羊茅基因组中，并在转基囡植株中得到表达。关键词：转基因高羊茅，逆境，OSISAPl，绿色荧光蛋白IIABSTRACTEnvironmentalstressisabigthreatenertoplants．Plantscommonlyhavetheirownrespondinga

4、ndregulatingsystemtodefendit．Withthedevelopmentofmolecularbiologyandbio—technology,significantprogresshasbeenmadetounderstandandmanipulateabioticstressresponses，andgeneticengineeringisthou曲ttobeusefultoimprovestresstoleranceforplants．Tallrescue(FestucaarundinaceaSchreb．)is

5、agoodlawngrassanditsbreedingresearchisahotspotallthetime．Inthisstudy,wehopetoobtainthestress—tolerantplantsbyover-expressingriceregulationgeneOSlSAPlintothetallrescue．OSlSAPlencodingazincfingerproteinwaSclonedfromjaponicarice(Oryzasalivasub．)．Twoplantexpressingvectorswerec

6、onstructedbygenerecombination．OnevectorispGreen0229一CaMV35S-OSISAPl一DHA，DHAmarkerisconvenientforwestern-blottinganalysis，theotherispGreen0229·CaMV35S-OSISAPl一GFP，GFPmarkerforgreenfluorescentobservation．ThesetwovectorswereverifiedbyDNAsequenceanalysisandenzymedigestion．Hypo

7、cotyleoftallrescue(crossfireII)isusedtoestablishtheinducionofembryoniccallianditsregenerationsystem．ThevectorsharboringOSlSAPlwereintroducedintotheembryoniccalliofhypocotylsbyparticlebombardment，and156regeneratedplantletswereobtainedbyscreeningonherbicide(PPT2mg‘L1)media．P

8、CRanalysiswasusedtoidentifytransgenicplants．Thereare26positiveplantletswithDHAmarkerand37