毕业论文--基因枪法介导RLK在玉米H99中的遗传转化

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1、目录中文摘要IAbstractII前言文献综述1第1节玉米转基因技术的研究现状11.1转基因技术在玉米中的应用11.2转基因技术的基本方法11.3转基因技术研究发展趋势2第2节抗冷基因RLK的研究进展32.1RLK基因家族简介32.2抗冷基因RLK的研究现状32.3研究RLK过程中面临的问题4第3节本文研究的背景及意义4第1章基因枪法介导的遗传转化5第1节实验材料51.1植物材料51.2相关试剂51.3实验仪器51.4培养基5第2节实验方法62.1幼胚的获取62.2基因枪法侵染玉米幼胚62.3轰击后的恢复培养及植株再生8第3节结果与分析93.1基因枪法轰击玉米幼胚93.2轰击前不同处理方式的影

2、响93.3继代培养及分化培养10第2章抗性植株的分子检测12第1节实验材料121.1实验试剂121.2实验仪器12第2节实验方法122.1CTAB法提取玉米叶片DNA122.2PCR检测13第3节结果与分析153.1提取总DNA153.2PCR检测15讨论17结论18致谢19参考文献20中文摘要东北地区是我国玉米的主产区，玉米在生长的各个阶段均有受到冷胁迫的风险，这样会影响玉米的质量和产量。植物的冷诱导基因只有在特定前题下才得以启动和表达，从而提高植物的抗冷能力。因此，利用遗传改良的方法创造玉米抗冷新材料是我们目前急需解决的问题。植物类受体蛋白激酶(RLK)是一类重要的植物蛋白激酶,作为信号分

3、子的受体,它位于细胞膜上,能够感受外界刺激,并通过磷酸化和去磷酸化作用开启或关闭下游的靶蛋白,从而在植物生长发育过程中起着重要的调节作用。RLK基因可以参与植物的冷害、高温、干旱等非生物胁迫的反应，对植物在低温条件下反应更加敏感，因此，RLK对冷信号的应答起着非常重要的作用。本研究利用玉米自交系H99做实验材料，通过基因枪法将抗冷基因RLK转入其中，共轰击500块胚性愈伤，经双丙氨膦筛选后，分化成苗143株，成活106株，移栽成活率为21.2%。PCR检测获得含有35S基因或RLK全长基因6株，阳性率为5.7%。本研究利用基因枪将抗冷基因RLK转入玉米H99中，为进一步研究RLK在玉米中的抗性

4、机制提供实验依据。关键词：玉米；RLK基因；基因枪法；遗传转化IAbstractNortheastChinaisthemainproducingareasofcorninChina,maizeatallstagesofgrowtharesubjecttotheriskofcoldstress,whichwillaffectthequalityandyieldofcorn.Thecold-induciblegenesofplantsareonlyactivatedandexpressedunderspecificconditions,therebyenhancingtheplant'scoldr

5、esistance.Therefore,theuseofgeneticimprovementmethodstocreatenewanti-coldcornmaterialisoururgentneedtosolvetheproblem.Plantreceptorproteinkinase(RLK)isaclassofimportantplantproteinkinasesthatactasreceptorsforsignalingmoleculesthatarelocatedonthecellmembraneandcansenseexternalstimuliandopenorshutdown

6、downstreamtargetsbyphosphorylationanddephosphorylationProtein,whichintheprocessofplantgrowthanddevelopmentplaysanimportantregulatoryrole.RLKgenecanbeinvolvedinplantchillinginjury,hightemperature,droughtandotherabioticstressresponse,theplantunderlowtemperaturereactionismoresensitive,therefore,RLKcold

7、signalresponseplaysaveryimportantrole.Inthisstudy,maizeinbredlinesH99wereusedasexperimentalmaterials,andthecoldresistancegeneRLKwastransferredintothembythemethodofgenegunmethod.Atotalof500embryogenicc