重组人β防御素3基因在小鼠乳腺中表达的初步的研究

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1、河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书学位论重组人B．防御素．3基因在小鼠乳腺中表文题目达的初步研究学位级别硕士学生徐雪丽学科导师姓名专业动物遗传育种与繁殖赵卫东姓名学位论文不f如需保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献

2、均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。研究生签名：徐‘琴两药，导师签名：、、弋∥◆，日期：o彦年6月帅日期：谚磊侈日学位论文使用授权及知识产权归属承诺本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须。按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的

3、有关规定，在毕业离开河南农业大学后，就在校期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单位为河南农业大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农业大学所有，否则，承担相应的法律责任。。f彳；≥l注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。l笼岂护l研究生躲练亏两导师弛茹靖学院领导繇≯’j，_{、{

4、h同期：Dg年6月廖同同期：哆辟≤月吊日期：03年6月‘哺致谢本试验研究是在导师赵卫东老师、李春丽老师和郑振宇老师的精心指导下完成的，从试验的设计和实施到论文的撰写和修改无不凝聚着三位导师的心血和关怀。导师

5、的言传身教，令我获益匪浅。三位导师渊博的学识知识、严谨的治学态度、敏捷的科研思路、宽广的胸襟、诲人不倦的师德以及强烈的责任感和敬业精神深深地感染着我、并将是我终生的楷模。在此，谨向三位导师致以崇高的敬意和衷心的感谢!导师组的赵卫东老师、李春丽老师、郑振宇老师在我三年的学习和生活中给予了诸多热情的帮助；河南农业大学牧医学院陈其新老师、尹清强老师及河南省农业生物技术开放实验室的杨国宇老师、黄晓书老师和谢惠玲老师及周清云老师等给予我诸多的指导和帮助；感谢武刚、任时好、张天星、宋根娣、郭杰、王婷婷、雷建、柴保国、华

6、欣欣、赵炎葱等师兄师弟师妹给予我的关心和帮助；同时白义春、赵云航、孙宜梅、王佳伟、赵高、裴广庆、刘玉波、楚乐然、孙小东、王永霞、冯华、左瑞雨、吕晓丽、郑培栋等很多同学在试验过程中也给予了热情的帮助，在此表示深深的感谢。正是以上各位领导、老师及同学的大力支持和热情帮助才使我的试验得以顺利实施，在此深深地表示谢意!感谢牧医工程学院的领导和全体老师给予的支持和帮助并真诚地感谢研究生处的领导和老师三年来给予的关心和帮助；没有您们的帮助和支持，我的硕士论文不可能顺利完成!最后，感谢我的家人多年来给予我生活上的关心、学

7、业上的充分理解和精神上的鼓励!感谢所有关心和帮助过我的亲朋好友、老师和同学!徐雪丽2008年5月河南农业大学2008届硕士学位论文摘要防御素是近年来发现的一种内源性多肽，在肌体免疫中发挥着重要作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、甚至是病毒都具有很强的抑杀作用，并且分子量小、热稳定好、水溶性强、无免疫原性，具有独特的研究和开发价值。人B一防御素一3(hBD3)是2001年发现的第三种人源性B防御素，与其他防御素相比，在抗菌活性方面具有明显的优势，对革兰氏阳性菌和阴性菌具有强烈的杀灭作用，是所有抗菌肽中抗

8、菌能力最强少数几种之一，只要几微克／毫升就可杀灭葡萄球菌、大肠杆菌、芽胞杆菌等，有很强的应用价值。我们曾使其在大肠杆菌中得到了高效表达，但是需要复性才能有活性，与传统的原核表达系统相比，应用动物乳腺生产重组蛋白产品具有生产成本低、产量大，表达产物的生物活性高、产品易于纯化等优点。本研究通过PCR克隆了牛B一酪蛋白(B—CN)基因57调控区和hBD3的基因组序列，并构建J"hBD3的真核表达载体pcDNA3．1(+)一hBD3，将此重组质粒注射到泌乳期小鼠乳腺内，进行初步的表达和活性检测。在此基础上，进一步构

9、建牛B—CN基因5’调控区和hBD3的重组克隆载体，以实现在小鼠乳腺中的特异表达。具体试验结果如下：1．hBD3基因的克隆根据GenBank中NT077531序列设计了一对引物，运用PCR技术，以人基因组DNA为模板，扩增了约1392bp的基因片段并把它克隆到pMDl8一T载体上，构建的重组质粒pMDl8一hBD3经PCR、酶切及序列测定表明，插入的序列与NT077531公布的hBD3基因同源性达到99．93％。