桑椹花色苷的双水相萃取、纯化、鉴定与体外模拟胃肠消化的的研究 (1)

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1、本人郑重声明：所呈交工作所取得的成果。除文中或集体已经发表或撰写过的的学位或证书而使用过的材在文中以明确方式标明。本学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授

2、权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：勇琶捡裼训年6月J歹日指导教师签名．．．／雾；嗍训11年占月心日江苏大学硕士学位论文摘要桑椹(mulberry)属于桑科(Moraceae)桑属(Morus)植物，为多年生桑科落叶乔木桑树的成熟果穗。桑椹营养丰富，富含多种人体所必需的营养物质，和沙棘、悬钩子等一起被誉为“第三代水果"。桑椹果实中含有大量的花色苷类色素，是一种良好的花色苷类色素来源。双水相萃取技术是一种高效而温和的新型分离技术，具有选择性好、分离时间短、萃取效率高、成本低等传统方法无可比拟的优势，目前已被广泛用于生物分子的分离和富集。目前国内外

3、未见关于双水相萃取分离花色苷类色素的报道。因此本文采用双水相萃取桑椹花色苷，并对其进行纯化、鉴定及体外模拟胃肠消化的研究，为桑椹花色苷及天然色素的研究与应用提供基础。本论文分为四个部分，主要研究内容和结果如下：第一部分不同品种桑椹的成分分析及其抗氧化活性测定对八种桑椹的成分和抗氧化活性进行了分析和测定。结果表明，其成分和抗氧化活性有明显的差异。水分含量为70．0％-"87．4％，粗蛋白含量为1．62％～5．54％，粗脂肪含量为0．23％---2．33％，其脂肪酸主要为亚油酸(C18：2)和棕榈酸(C16：o)，分别占总脂肪酸相对含量的26．40％～74．77％，9．29％～

4、22．26％。桑椹富含钾、钙、磷、钠、镁、铁、锌、铜、锰、硒等多种微量元素，其中钾的含量最高，为521．4~1718．6mg／lOOg干重(DW)。桑椹的总花色苷含量为66．00-193．00mg／1009鲜重(FW)；总酚含量为56．32-246．0GACme．／1009FW；总黄酮含量为40．94--,150．32Rumg／1009FW，其中绿椹子不含有花色苷和黄酮；总糖含量为1281．72—5755．60Glumg／lOOgFW。八种桑椹均具有较好的清除DPPH和OH自由基能力，其抗氧化活性与总酚含量具有较好的相关性，而与总花色苷含量的相关性次之。桑种340rusat

5、ropurpureaRoxb．显示出相对较好的营养价值和较高的抗氧化能力，因而选取用于下一步研究。第二部分双水相萃取桑椹花色苷的工艺研究以桑椹花色苷回收率和糖去除率为指标，考察了双水相体系的组成、乙醇浓度、硫酸铵浓度、样品浓度、pH、温度对桑椹花色苷和糖在两相中差向分配行为的影响，确定了双水相萃取的最佳工艺条件，并将双水相萃取法与传统的酸性乙醇提取法进行比较。结果表明，双水相体系组成为乙醇浓度为30％、硫酸铵浓度为20％、桑椹汁浓度为10％以及水，在pH4．5和萃取温度35"C下，桑椹花色苷的双水相萃取、纯化、鉴定及体外模拟胃肠消化的研究桑椹花色苷的回收率为85．1％，糖去

6、除率为89．5％。多次双水相萃取表明一次萃取既能分离大部分花色苷又能除去将近90％的游离糖。双水相萃取法得到的花色苷含量比传统酸性溶剂提取法提高了1．5倍，该方法糖去除率高，且操作简单，分离时间短，在天然花色苷类色素的分离方面具有较好的应用前景。第三部分桑椹花色苷的纯化及其鉴定采用SephadexLH．20对双水相萃取的粗色素进行纯化，共得到2个组分，其中组分l为主要的纯化产物。采用HPLC．ESI．MS／MS对粗色素、纯化组分l以及组分2进行了鉴定，粗色素中共发现有25种花色苷。组分1主要含有5种花色苷，分别为矢车菊素．3．葡萄糖苷、矢车菊素一3．芸香糖苷、芍药花素．3．

7、阿拉伯糖、天竺葵素．3．葡萄糖苷、芍药花素．3．鼠李糖一5一槐糖苷。而组分2则发现主要成分为一些槲皮素和山奈酚类黄酮物质，如：山奈酚一3．乙酰木糖苷、槲皮素．3．葡萄糖苷、槲皮素．3．芸香糖苷、槲皮素．3，5．阿拉伯二糖。第四部分桑椹花色苷的体外模拟胃肠消化研究采用体外消化透析法分别对桑椹粗色素和组分1进行模拟胃肠消化实验，并测定其消化产物的总花色苷和总酚的回收率以及抗氧化活性。结果表明，花色苷在模拟胃液环境中能稳定存在，花色苷的回收接近100％；经肠消化后，总花色苷回收率均很低，粗色素在透析液和滞留液的回收率分别