nr4a1在急性白血病的表达与其与caspase3的相关性研究

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1、郑州大学2009届硕士研究生毕业论文NR4AI在急性白血病的表达及其与casPase-3的相关性研究NR4AI在急性白血病的表达及其Caspase一的相关性研究研究生吕殿亮导师孙慧郑州大学第一附属医院血液内科河南郑州450052摘要背景与目的急性白血病(acuteleukemia，AL)是一种高度异质的人类恶性肿瘤，推测基因表达和蛋白活性的改变是其发生的分子基础。其本质特征是造血干/祖细胞恶性克隆，原始和幼稚细胞增殖失控，分化障碍和凋亡受阻。多种抑癌基因和癌基因及其相关基因的异常在急性白血病的发生发展中有着关键性的作用。核

2、受体NR4AI(Nuelearreeeptorsubfamily4，goupA，memberl)是一种立刻早期反应基因(immediate一earlyresponsegene)的产物，属于类固醇/甲状腺素/维生素A类超家族。最近发现，NR4AI蛋白是一种双向转录调控因子，具有转录激活和抑制双重功能，既具有类癌基因样活性，又是重要的抑癌基因，可以作用于许多与造血细胞增殖和凋亡有关的基因。造血细胞增殖分化和凋亡异常是许多血液系统恶性疾病，尤其是白血病发生的主要原因，NR4AI有可能作为抑癌基因调控造血细胞增殖/或分化基因的转录

3、激活剂，并促进白血病细胞的凋亡，它的缺失和失活可能在急性白血病的发生发展中有重要的作用。研究表明，NR4AI在胞浆中可以降低激活蛋白一1(AP一l)因子JunB和c-jun的表达水平，从而降低细胞突变的几率。NR4AI可以与Fas一L和TRAIL相互作用，改变细胞的凋亡水平。NR4AI通过自身的LBD与BCL一2结合，从胞浆转移到线粒体，直郑州大学209届硕士研究生毕业论文NR4AI在急性白血病的表达及其与casPase一3的相关性研究接促发细胞色素C的释放，引起细胞凋亡。NR4AI还可以改变BCL一2的构象，使之暴露BH

4、3区域，由抗凋亡蛋白成为促凋亡蛋白。研究发现NR4AI和caspase一3在多种肿瘤中异常表达，NR4AI和caspase一3的异常表达可能参与了多种肿瘤的发生，发展。但NR4AI在急性白血病细胞中表达的报道极少，而casPase一3在急性白血病细胞中的表达尚未见报道。本实验拟采用免疫细胞化学法检测初治的AL患者骨髓单个核细胞中NR4AI蛋白及easpase一3蛋白的表达，分析NR4AI的表达与easpase一3表达的相关性，同时分析NR4AI与临床特征尤其是染色体组型及融合基因的关系，探讨NR4AI及casPase一3蛋

5、白水平的异常在AL发病中的可能作用，探索急性白血病治疗新的契点。材料与方法1.研究对象:所有标本均取自2008年8月至2009年2月郑州大学第一附属医院血液科门诊及住院患者。(1)初治急性白血病组:经细胞形态学、组织化学和细胞免疫学和(或)分子遗传学确诊的AL患者49例，年龄17一73岁(中位年龄42岁)。其中男30例，女19例。将全部AL患者分为两组:①急性髓细胞性白血病(AML)31例，其中Mol例，Mll例，M:19例，M34例，M42例，，M54例。包括t(8;21)(q22;q22);AMLETo6例，t(15;

6、17)(q23;q21);pML-RARa3例，t(16;16)(p13;q22)或inv(16)(pl3;q22)，(CBFp/MYHll)2例。其他类型8例，正常3例，未检测9例。②急性淋巴细胞白血病(从助18例;其中t(9;22)(q34;q31)BCR/ABLZ例，其他类型7例，未检测9例。(2)完全缓解的急性白血病(从一CR)病人骨髓29例，为初治组完全缓解后标本。(3)正常对照组12例，为非恶性血液病骨髓正常者标本。2.标本处理:化疗前采集患者骨髓和对照者骨髓Zml，分离单个核细胞，制备细胞滴片，采用免疫组织细

7、胞化学染色方法用于检测N’R4A1及casPase一3蛋白的在初治AL、AL一CR及正常对照者骨髓细胞中的表达。3.数据统计:所得数据经SPSsll.0统计软件处理，NR4AI蛋白和caspase一3蛋白表达积分阳性率比较采用卡方检验进行显著性检验，用spearman进行相关郑州大学2009届硕士研究生毕业论文NR4AI在急性白血病的表达及其与casPase一3的相关性研究性分析，以a二0.05为检验水准。结果1.NR4AI在正常人骨髓单个核细胞中83.33%呈现胞核或(和)胞浆的阳性和(或)强阳性表达。对比其在初治AL患

8、者骨髓单个核细胞中NR4AI的表达积分阳性率18.36%，差异有统计学意义伊<0.005)。其中初治AML、ALL患者骨髓单个核细胞中NR4AI的表达细胞阳性率分别为16.13%、22.22%，两者比较差异无统计学意义(尸>0.05)。在AL.CR中，骨髓单个核细胞中NR4AI的表达积分阳性率为75.8