骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠微小病变肾病综合征的实验研究

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1、骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠微小病变肾病综合征的实验研究摘要目的：1、分离、培养及鉴定大鼠骨髓源性间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)，并获取高纯度、高浓度的BMSCs；2、制作持续、稳定的微小病变型肾病综合征大鼠模型。3、观察BMSCs移植治疗MCNS大鼠的疗效，通过模型大鼠的尾静脉输注BMSCs，定期检测血中蛋白含量、甘油三脂、总胆固醇、肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白量等指标；观察肾脏病理损伤情况，并比较各干预方案间疗效的差异。方法：l、大鼠骨髓间充质干细胞(BM

2、SCs)的培养及鉴定：大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的采集，Ficoll400连续密度梯度离心法纯化单个核细胞；BMSCs的差异贴壁法培养、传代、扩增、冻存、复苏；大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的鉴定：显微镜下观察细胞形态并绘制生长曲线，流式细胞仪分析细胞表面标志物表达情况。2、模型建立：在非麻醉状态下尾静脉一次性按7．5mg／kg体重注射盐酸阿霉素制作微小病变性大鼠肾病综合征模型。3、实验分组：实验分6组，每组5只雄性SD大鼠。A组(正常对照组)；B组(模型对照组)；C组(强的松治疗组)；D组(BMSCs治

3、疗组)；E组(强的松+MSCs治疗组)；F组(BMSCs+骨髓治疗组)。后5组大鼠均制成微小病变肾病综合征模型。4、BMSCs移植：模型建立后，将符合输注要求的第2～5代细胞，胰酶消化后，通过SD大鼠的尾静脉输注近交系SD大鼠BMSCs，同时，各治疗组开始按治疗方案进行干预，定期检测血中蛋白含量、甘油三脂、总胆固醇、肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白量等指标，检测时间为移植后1w、4w和8w。5、部分动物分别在注射阿霉素前、注射后第2周及实验结束时处死获取肾脏组织，光镜、电镜下观察肾脏病理改变；部分动物分别在干细胞注射后2

4、4h、72h后处死留取肾脏组织，冰冻切片观察荧光标记干细胞在肾脏内的分布情况，比较不同干预方案间的疗效差异。结果：l、通过密度梯度离心和差异贴壁培养的方法，成功从大鼠股骨和胫骨骨髓内分离出BMSCs，经进一步检测，BMSCs具有很强的增殖能力，并保持稳定的表型特征及多向分化潜能。2、给大鼠一次性尾静脉注射盐酸阿霉素后，通过观察大鼠血、尿等生化指标及相应阶段大鼠肾脏病理改变，发现该模型符合微小病变肾病综合征诊断要求，成功建立了微小病变。肾病综合征大鼠模型。3、通过大鼠尾静脉输注大鼠BMSCs，毛发光泽改善；皮肤溃疡愈合

5、良好，新生皮毛生长良好，明显改善了大鼠身体状况；大鼠蛋白尿明显降低，血脂、血白蛋白等指标改善；冰冻切片观察到BMSCs能够被趋化到受损伤的肾小球：病理观察BMSCs到能够逆转肾脏病理损伤；表明通过大鼠尾静脉移植BMSCs治疗大鼠微小病变肾病综合征具有明显的疗效。结论：l、通过密度梯度离心和差异贴壁法可以获取纯度较高的大鼠BMSCs；2、给大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素，可成功建立微小病变肾病综合征大鼠模型。3、经MCNS大鼠外周静脉输注大鼠BMSCs，能够有效减少尿蛋白，提高血浆蛋白水平，改善脂质代谢，保护模型鼠肾功

6、能，促进肾脏病理损伤的修复，证实了BMSCs移植对MCNS大鼠具有明显的治疗作用。关键词：骨髓；间充质干细胞；细胞培养；肾病综合征；移植；大鼠ExperimentalstudyontherapeuticeffectofbonemarrowmesenchymalstemcellstransplanttoratswithminimalchangenephriticsyndromeAbstractobjectives：1．Toisolate，cultureandidentifyofratsbonemarrow-derive

7、dmesenchymalstemcelIs(BMSCs)invitro，andtoharvestsuper-Purity,super-densityBMSCs；2．Tofabricatepersistentandstabileminimalchangenephroticsyndrome(MCNS)ratsmodle．3．ToobservethecurativeeffectbyinjectingBMSCsintocaudalveinofmodelratswhenratsweremodelingwell．Toobserv

8、ethebloodandurinebiochemistryexaminations,suchasproteinlevel，triglyceride，totalcholesterol，creatinine，ureanitrogeninbloodand24hurineproteinregularlyeta1．Toobserverenalpathol