江苏省不同口岸白纹伊蚊遗传特征分析

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1、万方数据ADissertationin．ImmunologyAnalysisofthegeneticcharacteristicsontheAedesalbopictUSindifferentportsofJiangsuthroughtheapplicationofmo1ecularbiologytechniques一一一Candidate：LiuQian—yingSupervisor：YeSongMedicalSch001AnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo．168，ShungengRoad，Huainan，232001，P．R．CHINA万

2、方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塞邀堡王太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：刻俑敏签字日期：血I婢口乡月口珀学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塞徼理王太堂有保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于安徽理工大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许

3、论文被查阅和借阅。本人授权塞邀堡三太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：劫髑颖导师签名：签字日期：2班印占月够日签字日期：扪j年6月歹日万方数据摘要捅要目的通过对不同基因型的分子标记技术进行比较，选出最适合对白纹伊蚊进行鉴定和遗传分析的分子标记技术。并对江苏省十个口岸的白纹伊蚊进行溯源性分析，揭示白纹伊蚊的分布与地理距离和港口地域的相关性及其遗传特征。方法提取江苏省十个口岸白纹伊蚊的DNA，将提取的线粒体DNA通过PCR对CoI基因进行扩增测序，测序结果在M

4、EGA上通过ClustalWMultiplealignment模块将碱基对齐并构建邻近法进化树；将核糖体DNA的ITS基因连接到质粒载体中，经克隆后进行测序，通过测序结果构建进化树并进行Mantel检验；对基因组核DNA用AFLP技术进行分析：通过高频“氐频剪切酶(EcoⅪ／MseI)对核DNA进行酶切和连接，通过优化过的十对选择性引物进行再次扩增后，经毛细管电泳构建“0”“1”矩阵，通过NTSYS软件计算遗传相似性系数和进行Mantel检验，并构建UPGMA进化树。通过rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析对江苏省不同口岸的白纹伊蚊进行同源性分析。结果通过三种方法对江苏省十个口

5、岸的白纹伊蚊进行鉴定和同源性分析：1．通过对mtDNA．COI基因进行扩增可以很好的对白纹伊蚊进行鉴定，但同源性较高，碱基差异较少，通过进化树分析遗传差异较小，对不同地区的白纹伊蚊不能被很好的区分；2．核糖体DNA的ITS基因通过克隆测序后构建的进化树表明江苏省不同口岸的白纹伊蚊基因序列分为两支，其中，连云港的白纹伊蚊与其他地区的差异较大，单独聚成一支；在另一支中，无锡的白纹伊蚊单独为一支，常州、泰州、徐州和扬州进一步分化成一个小分支，而常州和泰州的白纹伊蚊在此基础上进一步分化为一个较远的小分支；3．对核DNA进行AFLP分析，通过毛细管电泳筛选出了最适合进行白纹伊蚊AFLP分析的十对

6、引物组合，共扩增396条清晰可辨的基因片段，其中包括共有的位点31个，有差异的位点365个，多态性百分率为92．2％，多态性位点丰富，能很好的对白纹伊蚊的遗传差异进行区分。对江苏省十个口岸的白纹伊蚊通过AFLP分析和ITS基因检测的Mantel检验结果表明，白纹伊蚊的遗传距离与地理距离不呈线性相关。而UPGMA进化树在相似性系数0．66处可以将江苏省十个口岸的白纹伊蚊分为三支，常州、淮安、南京、南通、苏州、泰州、徐州、扬州八个地区的白纹伊蚊为一支，无锡和连云港各自分为一支。结论实验表明rDNA．ITS基因的扩增和核DNA的AFLP分析均能对白纹伊蚊进行同源性分析，但AFLP分析是对全基

7、因组进行分析，能更好的反映出白纹伊蚊万方数据摘要的遗传差异。并揭示了不同口岸的白纹伊蚊的遗传距离与地理距离没有相关性，而与港口的地域性密切相关，为进一步的研究奠定了基础。图[20]表[8]参[53]关键词：白纹伊蚊；AFLP；ITS；COI；溯源分析；沃尔巴克氏体分类号：(R392．2)；万方数据摘要Abs仃actObjectiveComparethedifferentgenotypesofmolecularmarkersbYamplifica