健脾补肾方防治家兔激素性股骨头坏死的实验的研究

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1、l

2、Illl1II11111111UIIlY1778837原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下独立完成的，文中除注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研成果。对本文研究做出重要贡献者，己在文中以明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。论文作者签餐j睥导师签名’关于学位论文使用授权的声明本人完全知道中国中医科学院有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权中国中医科学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段

3、保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名妞一一一健脾补肾方防治家兔激素性股骨头坏死的实验研究摘要目录第一部分文献综述综述一激素性股骨头坏死脂质代谢紊乱学说及中医药认识⋯⋯⋯⋯⋯～⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。9综述二骨髓问充质干细胞向成骨细胞诱导分化的研究进展第二部分实验研究实验一健脾补肾方对兔激素性股骨头坏死组织形态学1材料与方法1．1实验动物⋯⋯。1．2实验药品1．3主要实验仪器与设备⋯⋯⋯⋯．1．4实验方法1．5实验结果1．6讨论1．7结论实验二健脾补肾方含药血清促进rMSCs成骨分化的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．491材料

4、与方法1．1实验动物．50．靳．鳓．51．5l1．2实验药品⋯。1_3主要实验仪器与设备1．4实验试剂的配制1．5实验方法1．6实验结果1．7讨论1．8结论致谢个人简历．附图5658⋯．63钉n犯弛敛鲍”靳鸵钉健脾补肾方防治家兔激素性股骨头坏死的实验研究摘要1研究目的研究探讨健脾补肾方防治SINFH的有效途径和作用靶点，以便更好的指导临床应用，提高临床疗效，发挥中医药防治SINFH的优势。2研究方法健康成年家兔50只随机分为5组(n=10)：模型组、空白对照组、健脾补肾高剂量组(简称高剂量组)、健脾补肾中剂量组(简称中剂量组)和健脾补肾低剂量组(简称低

5、剂量组)。模型组及观察组按Matsui方法结合前期预实验结果复制家兔SINFH模型，即以甲泼尼龙琥珀酸钠20mg／kg／d的剂量臀肌注射，连续3天，同时予青霉素2万u／kg肌注，每周2次，预防感染。各治疗组动物分别以高(5．529／kg／d)、中(2．76g／l(g／d，相当于60kg体重成人每千克所需剂量的2．3倍)、低(1．38g／kg／d)剂量灌胃健脾补肾方汤药，连续12周。模型组与空白对照组灌胃蒸馏水59／kg／d，连续12周。在首次给药后的l、4、8和12周，灌胃后12小时，采血检测血脂TG、CHO、HDL、LDL和PT、APTT、AT-Il

6、l等凝血指标。末次采血后处死全部动物，取双侧股骨头连同千骺端组织行HE染色，光镜下观察骨小梁、骨细胞、髓腔脂肪细胞的变化。在Image-proplus4．5图形分析系统下定量观察，求出空骨陷窝率以及脂肪组织面积。石蜡切片行masson染色，Image-proplus4．5图形分析系统下定量观察软骨及骨小梁内胶原分布并计算绿染的胶原面积。末次给药后以健脾补肾高剂量组和空白对照组为动物来源制备含药血清，冷存备用。第12周处死动物前，于空白组任取2只家兔分离得到MSCs。取经鉴定和纯化的第3代细胞，随机分为健脾补肾加成骨组、成骨组、健脾补肾组和空白对照组4组

7、，各组以相应培养液培养。分别于诱导后的第2、4、8、12、16天，各诱导组进行ALP活性的检测；更换培养液22d后，各组标本用四环素标记法行矿化结节染色，光镜下计数钙结节的数量。采用SPSSl2．0软件进行数据统计分析，组间计量资料数据比较采用单因素方差分析，组间股骨头坏死率的比较采用卡方检验；计量资料数据以均数士标准差(i±S)表示，P<0．05为有统计学意义。中国中医科学院2006级硕J二研究生学位论文3研究结果3．1血液学检测模型组与正常对照组比较，4w、8w和12w时上述各项血脂和凝血指标差异显著或非常显著(P

8、组与模型组比较，在治疗后的4w和(或)8w和(或)12w，上述各项指标差异显著或非常显著(P低剂量组>中剂量组>高剂量组>空白组。正常空白对照组无一例出现SINFH，模型组12w时有7只出现SINFH，发生率为77．8％(7／9)，与正常对照组比较有显著统计学意义(P

9、(5／10)、低剂量组70％(7／10)，与模型组比较无统计学意义(P>0．05)。各治疗组间