茉莉素的化学结构改造与其抗肿瘤作用的研究

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1、华中科技大学博士学位论文茉莉素的化学结构改造及其抗肿瘤作用研究华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科博士研究生：蒋国松指导教师：曾甫清赵军教授中文摘要一、茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物设计、合成及鉴定目的：设计、合成茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物，为进一步研究其活性奠定基础。方法：以马来酸酐为基础原料合成中间链接体；在茉莉酸的羧基端通过酯键连接上中间链接体；手工固相多肽合成法合成FITC标记TAT穿膜肽；通过结合反应将TAT穿膜肽以硫键与茉莉酸-中间体反应连接，合成茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物。结果：经核磁共振氢谱鉴定，茉莉酸与中间体链接成功；经高效液相色谱鉴定，新合成

2、TAT-FITC多肽及茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物纯度均>95%；经质谱鉴定，TAT-FITC多肽及茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物分子离子峰与设计一致。结论：茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物成功合成，为进一步研究其抗肿瘤活性奠定了基础。二、茉莉素抗肿瘤生物活性及机制研究目的：比较分析茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物的抗肿瘤生物活性，并探讨其作用机制。方法：激光共聚焦显微镜观察茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物细胞内摄；MTT比色法检测细胞活性；克隆形成实验检测细胞增殖能力；Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学改变；PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡率；Realtim

3、eRT-PCR检测XIAPmRNA表达；Western-blot检测XIAP、caspase-3、caspase-9蛋白表达；裸鼠皮下瘤模型建立及给药处理后，测量肿瘤的大小及重量，TUNEL染色法检测肿瘤组5华中科技大学博士学位论文织细胞凋亡。结果：0.05mmol/LTAT穿膜肽和0.05mmol/L茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物作用EJ、PC-3细胞3h后，细胞内均可见FITC发出的强烈绿色荧光；与茉莉酸相比，茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物使EJ、PC-3细胞的ICB50B分别从3.24mmol/L降至0.05mmol/L、3.48mmol/L降至0.06mmol/L

4、(P<0.05)；与空白对照相比，0.05mmol/L茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物作用后，EJ与PC-3细胞克隆形成能力分别下降81.3%和78.5%(P<0.05)，Hoechst33258荧光染色显示细胞核呈固缩或碎块状致密浓染的凋亡细胞数量明显增多，细胞凋亡率分别提升至45.3%和39.6%(P<0.05)；XIAPmRNA和蛋白表达显著下调，XIAP基因转录活性未受影响；与给与PBS对照组相比，茉莉酸-TAT穿膜肽共轭物抑瘤率达85.6%(P<0.05)，TUNEL染色显示细胞核染色阳性的凋亡细胞明显增多。结论：连接穿膜肽后茉莉酸活性显著提高，茉莉酸-TAT

5、穿膜肽共轭物能抑制人肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡，转录后降解XIAP是其作用机制之一。6华中科技大学博士学位论文ChemicalmodificationofjasmonatesandthestudyoftheiranticancereffectsonhumancancercellsDepartmentofUrology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyDoctorCandidate:JiangGuosongSupervisor:Prof.ZhaoJu

6、n&Prof.ZengFuqingAbstractPart1Design,synthesisandidentificationofjasmonicacid-TATcellpenetratingpeptideconjugateObjective：Todesign,synthesizeandpurifythejasmonicacid-TATcellpenetratingpeptideconjugate.Methods：Thecross-linkerwassynthesizedbasedonMaleicanhydride.Carboxylterminalofjasmon

7、icacidwascoupledtothecross-linkerthroughtheesterlink.FITC-labeledTATcellpenetratingpeptidewassynthesizedbymanualsolidphasepeptidesynthesistechnique,andwaslinkedtojasmonicacid–intermediatewithsulfidebondthroughfixationreaction.Results：IdentifiedbyHNMR,jasmonicacidwassuccessfullylinkedt

8、ointe