hiv1+vpr对细胞周期的影响和致凋亡作用的研究

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1、硕士学位论文中文摘要摘要背景和目的：人免疫缺陷病毒(HIV-1)病毒蛋白R(Vpr)含有96个氨基酸，在HIV一1，HIV一2，SIV中高度保守。Vpr对AIDS的致病机理极其重要，研究表明Vpr在病毒复制过程中具有多种功能：1．影响反转录过程的准确性；2．作为前整合体复合物的一个组成部分参与病毒DNA转运至细胞核；3．使被感染细胞的繁殖周期发生G2期阻滞：4．诱导被感染细胞的凋亡；5．与宿主基因共同反式激活HIV-1长末端重复序列(LongterminalrepeatLTR)。但在自然感染过程中它的多态性及其确切功能还有待研究。HIV—lVpr氨基酸

2、序列特定位点的变异可能会使病毒复制能力减弱、病毒载量下降、疾病进展延缓。本研究首次观察中国感染者HIV一1Vpr变异株对其致宿主细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的影响，并分析上述现象的可能机制，以及探索Vpr所致细胞周期的变化与细胞凋亡两者的可能关系。方法：本研究室曾检测了154份中国感染者的HIV-1vpr基因的变异情况，并结合临床资料观察到Vpr蛋白的C末端63、70、85、86、89和94位氨基酸的变异与临床病程改变可能有关。经过统计分析从中挑选出具有中国人HIV一1感染者代表性的14个vpr变异片断。本研究将这些vpr基因PCR产物经纯化后进行Hi

3、ndHI和BamHI双酶切，以pcDNA3．1(+)真核表达质粒连接转化实验，14株重组的pcDNA3．卜vpr变异株送测序确认重组成功。将重组质粒用电转染的方法转染Jurkat细胞，用脂质体转染至Hela细胞，同时设立野生株vpr基因、突变株vpr—FS基因、细胞空白对照、空载体空白为对照。经RT-PCR检测目的基因转染成功后，以Pi染色和流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期和细胞凋亡。结果：14个带有不同变异位点的vpr基因片段转染Jurkat细胞和Hela细胞后，显示出不同的致细胞周期阻滞和凋亡的能力。导入HIV-1vpr保守系列后，Jurkat细

4、胞和Hela细胞的G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高，但导入vprC末端截断的vpr—Fs片断、空载体pcDNA3．1(+)和未转染的Jurkat细胞SNHela细胞无此现象。导入中国感染者HIV-1vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V，85P，86G，94G突变的片段，较vpr保守片断其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降，且Vpr蛋白的AE亚型致细胞周期阻滞和凋亡能力普遍较其他亚型为低。初步发现vpr诱导G2期百分比越高其所致凋亡率越高。结论：本研究初步发现以下现象：1．HIV—lvpr保守株有明显的致硕士学位论文中文摘要感染细胞G2周期阻

5、滞和细胞凋亡的能力，但vprC末端截断的vpr—Fs片断无此功能。2．首次发现中国感染者HIV一1vpr基因表达蛋白的70V，85P，86G，94G突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降，Ypr的AE亚型普遍致细胞周期阻滞和凋亡能力较其他亚型为低。3．14个变异片断的分析显示vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关，提示两者的发生机制可能有一定的关联。关键词：HIV-1，Vpr蛋白，G2期阻滞，细胞凋亡Ⅱ硕士学位论文英文摘要ABSTRACTobjectiveTheviralproteinR(Vpr)ofHIV-1isasmallbasi

6、cprotein(14kOa)of96aminoacids，andiswellconservedinHIV-1，HIV-2andSIV．TheroleofVprinthepathogenesisofAIDSisundeniable，butitsgeneticdiversityandrealfunctionsduringthenaturalcourseofinfectionarestillsubjecttodebate．TheVprroleinthepatho—physiologyofAIDShasbeenbelievedveryimportant．Ex

7、perimentalanimalsinfectedwithsomedefectivevprmutantsoravprnullmutantshoweddecreasedvirusreplicationanddelayeddiseaseprogression，displayedaverylowvirusburdenanddidnotdevelopimmunodeficiencydisease．Vprhasbeenshowntoplaykindsoffunctionsduringvirusreplication，includinganeffectonthea

8、ccuracyofthereverse-transcriptionprocess，thenuc