骨髓间充质干细胞对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响与作用机制研究

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1、摘要摘要目的：通过观察骨髓问充质干细胞(BMSCs)对博来霉素致小鼠肺纤维化动物模型的影响，探讨治疗肺纤维化的新方法。方法：体外分离、培养雄性6—8周C57BL／6J小鼠间充质干细胞。60只6-8周雌性C57BL／6J小鼠随机分为3组：阴性对照组(P组)，阳性对照组(B组)，BMSCs治疗组(B硼组)。P组于气管内注入PBS50#L，B组及B+M组按5肛g／g剂量气管内注入博莱霉素50肚制备肺纤维化模型，B+M组于造模后6h经尾静脉注射BMSCs1×107／mL，200弘L。实验第3，7，14，28天分别处死5只小鼠，收集小鼠肺泡灌洗液检测其细胞因子IFN—y、

2、IL-4的浓度；留取肺组织行病理HE染色，羟脯氨酸含量测定，提取肺组织RNA以检测TGF-BlmRNA、IFN—YmRNA、IL-4mRNA基因表达情况；提取肺组织的DNA检测雄鼠的性别决定基因(sry基因)。结果：1、肺组织病理：B+M组在第7、14天的肺泡炎较B组明显减轻，第28天肺纤维化程度较B组明显减轻。2、肺系数：B及B+M组各时间点肺系数均较P组稍高，但B+M组较B组明显降低。3、HYP含量：在3、7天，三组的HYP含量无明显差异；B+M组的HYP含量在第14天与P组相当，在28天稍高于P组，但均明显低于B组。4、TGF-13lmRNA：B及B+M组

3、各时间点TGF-BlmRNA表达均较P组高，但在后三个时间点B+M组明显低于B组。5、sry基因检测：B+M组各时间点均有雄性小鼠的sry基因存在。6、肺组织IFN-YmRNA、IL一4mRNA表达情况：B及B+M组IFN—YmRNA、IL-4mRNA表达在四个时间点均明显高于P组，在后三个时间点B+M组IFN-YmRNA较B组明显偏低，在后两个时间点B+M组IL一4mRNA较B组明显偏低；比较IL-4mRNA／IFN—YmRNA，B+M组在后两个时间点明显低于B组。7、肺泡灌沈液中IFN-y、IL-4的浓度：B及B+M组IFN-Y、IL一4浓度在四个时间点均高

4、于P组，但在后三个时间点B+M组IFN-Y浓度较B组明显偏低；且其IL一4浓度在四个时间点均较B组明显偏低；比较IL一4／IFN-Y浓度，B+M组在3，14，28天高于P组，在7、14、28天明显低B组(7、14天：P(0．05；28天P=O．05)。结论：1、外源性BMSCs经尾静脉注射可以到达肺损伤部位，且可以长期存在；2、外源性BMSCs可以减轻肺泡炎、肺纤维化的程度；3、外源性BMSCs发挥抗炎、抗纤维化的bj．能是通过逆转Thl／Th2细胞因子的失衡实现的；4、外源性BMSCs摘要到达损伤肺后可能抑制TGF-13lmRNA的表达，从而抑$1JfF-维化

5、形成。关键词：肺纤维化；骨髓fBJ充质干细胞；羟脯氨酸；转化生长因子一13l(T(；F一131)；干扰素一Y；白介素一4；sry性别决定区ABSTRACTobjective：Toexploretheeffectsofbonemarrow-derivedmesenchymalstemcellsonbleomycin—inducedpulmonaryfibrosisinmiceandtostudythemechanismofitseffects．Methods：BonemarrowderivedBMSCswereharvestedfrommaleC57BI／6Jmi

6、ceinvitro，culturedintocultureflaskswithmediumandexpandedtothefourthpassagefortheexperiments．60C57BL／6Jmicewererandomlydividedinto3groupswith20ofeachgroup：negativecontrolgroup(GroupP)、positivecontrolgroup(GroupB)、mesenchymalstemcellstransplantinggroup(groupB+M)．GroupPwereinstilledwith

7、50I／xLPBSviatracheadiscission．GroupBandgroupB+Mweremadeaspulmonaryfibrosismodelsbyintratrachealinstillationofbleomycin(5#g／g，50#L)．After6hours，thesuspensionofBMSCswereinjectedintomiceviathetailveinofB+MgroupwithaconcentrationoflxlO7／mL，200u1．Fivemiceweresacrificedatdays3,7，14，28after

8、modelinginba