创伤后应激障碍大鼠模型的情景恐惧记忆神经机制的研究

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1、博士学位论文中文摘要摘要目的：以单次强烈足底电击应激来建立大鼠创伤后应激障碍(Post-traumaticstressdisorder，PTSD)模型，并结合经典巴甫洛夫条件恐惧记忆检测程序，来研究PTSD动物模型的情景恐惧记忆。本研究关注：1，形成情景恐惧记忆的PTSD模型动物脑内杏仁核中胃泌素释放肽(gastrin．releasingpeptide．GRP)mRNA和蛋白的改变，同时探索这种变化与恐惧记忆程度之间的相关关系，以研究GRP在恐惧记忆形成中的作用。2，地西泮对模型动物恐惧记忆水平和GRP的影响，进一步探索PTSD的发病机制中GRP与GABA(Y—a

2、minobutyricacid，y．氨基丁酸)系统之间是否存在相互作用及其形式，为寻求PTSD治疗新方法以及地西泮的药理机制的研究提供线索。研究方法：雄性SD大鼠随机分为5组，每组6只。分对照组、30min组、24h组、30rain+地西泮组、24h+地西泮组。首先使动物熟悉电击箱(第一天，30min)，第二天进行条件恐惧训练程序，训练前30分钟予两组地西泮组以腹腔注射2mg／kg地西泮，其余三组予以注射同体积的生理盐水。条件恐惧训练总时程30分钟，采用的是一个文献所用的PTSD动物模型的电击程序，电击强度显著大于一般条件恐惧训练程序：随机给予60个不可逃避足底电

3、击，每个持续15秒，lmA。动物总共会受到15分钟电击。对照组同样放于笼中30分钟，但电击电流0mA。电击结束30分钟后测定对照组、30min组和30min+地西泮组僵立行为，然后立即将其深度麻醉，断头处死，取双侧杏仁核样本。电击结束24小时后测定24h组和24h+地西泮组僵立行为，然后同上取双侧杏仁核样本。僵立行为测定方法：测4分钟僵立行为(僵立行为是一种普遍见于啮齿类的防御行为，表现为刻板式的蹲伏姿势，可以有一定程度的摇摆，大鼠外观除呼吸运动以外其余的肌肉运动均消失，是大鼠恐惧表达的行为方式)。每lO秒测一次，记录僵立行为次数占总次数的百分比。动物取双侧杏仁核

4、样本后，分别予以提取总RNA和蛋白，进行半定量RT-PCR和半定量Western—blot测定杏仁核中GRPmR_NA和GRP蛋白的水平。’结果：l，条件恐惧训练组大鼠对恐惧情景的记忆水平明显高于对照组：与对照组相比，大鼠在经条件恐惧训练后30min或24h后再次面临恐惧情景时，表现出明显的僵立行为百分比的升高，单因素方差分析显示F=112．22，P<0．001。组间两两比较(LSD法，以下同)显示，与对照组(6．88±4．26)相比，30rain组(84．72±11．61，P

5、升高。30min组和24h组之间僵立行为无明显差异。博士学位论文中文摘要2，注射地西泮后大鼠对恐惧情景的记忆水平明显降低：两因素方差分析显示注射地西泮后，其30min或24h后再次面临恐惧情景时的僵立行为百分比与注射生理盐水相比较有明显降低，与注射生理盐水(84．72±11．61、77．08±11．93)相比，地西泮使僵立行为降低(46．53±7．30、41．67±9．24)，F=81．69，P<0．001，差异具显著统计学意义。而不同时间因素间其僵立行为无显著性改变。3，条件恐惧训练后GRPmRNA水平升高：大鼠在经条件恐惧训练后30min或24h后再次面临恐惧

6、情景时，表现出明显的GRPmRNA表达水平的升高，单因素方差分析显示F=5．07，P<0．05。组间两两比较显示，与对照组(41．904-16．89)相比，30min组(69．73±15．65，P=0．019)和24h组(72．83±22．04，P=0．011)两组GI冲mRNA表达明显升高。30rain组和24h组之间GRPmRNA水平无明显差异。4，注射地西泮后条件恐惧训练组大鼠的GRPmRNA水平明显低于注射生理盐水组：两因素方差分析显示大鼠在注射地西泮后，其30min或24h后再次面临恐惧情景时的GRPmRNA表达与注射生理盐水组相比有显著降低，与注射生理

7、盐水(69．73±15．65、72．83±22．04)相比，地西泮使GRPmRNA表达水平降低(47．75±8．63、41．20±6．70)，F=20．63，P=0．002，差异具统计学意义，表示地西泮能对GRPmRNA表达水平产生明显影响。5，条件恐惧训练后GRP蛋白水平升高：大鼠在经条件恐惧训练后30min或24h后再次面临恐惧情景时，表现出明显的GRP蛋白表达水平的升高，三组整体方差齐，单因素方差分析显示F=5．30，P=0．018，组间两两比较显示，与对照组(34．46±8．96)相比，30min组(55．29±13．41，P=0．006)GRP蛋白水平明

8、显升高，2