血管内皮生长因子(vegf)和端粒酶在翼状胬肉中表达的研究

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1、中文摘要英文摘要研究论文前言材料结果附图附表讨论参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯····⋯⋯．．⋯．．一．．．．·37个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38中文摘要血管内皮生长因子(VEGF)和端粒酶在翼状胬肉中表达的研究摘要目的：翼状胬肉是眼科较为常见的眼表疾病之一，现研究表明，翼状胬肉是一种组织增生性结膜疾病，其发病机理仍不十分清楚，可能与细胞异常增殖和凋亡异常有关。由于翼状

2、胬肉术后的高复发，有资料表明其与肿瘤有相关性，端粒酶在翼状胬肉的高表达可能是一个重要原因，所以有必要将端粒酶进行深入的研究。本实验研究进展期翼状胬肉组织端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶(humantelemerasereversetranscriptase，hTERT)mRNA的表达。增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)作为DNA聚合酶的辅助蛋白直接参与了细胞的增殖活性，在静止期的细胞内含量很少，从G1晚期开始增加，S期达高峰，G2期、M期明显下降，故被认为是一种准确简便且可了解细胞增殖状况的重

3、要研究指标。翼状胬肉为增生性病变，本研究拟对病例组与正常组PCNA的免疫组化比较。VEGF是一种功能强大且能产生多种生物学效应的细胞因子，它是1989年Ferrarra在牛垂体滤泡星状细胞培养液中分离纯化出来的一类糖蛋白，是血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)家族的一个成员，分子量为34．45KD，序列高度保守，广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中，它是最直接的血管内皮细胞促分裂素，并且作为血管生成旁分泌刺激因子而被分泌。VEGF是目前研究发现的功能最强的血管形成促

4、进因子，它可以增强微血管的通透性，刺激内皮细胞分裂，增加组织因子和某些蛋白酶的产生。VEGF主要与VEGF受体相互作用，通过内皮细胞的细胞内信号转导途径引起血管通透性增加，促进血管内皮细胞增殖、迁移，从而诱导血管新生。有研究表明血管的生长和成熟是高度复杂和协调的过程，需要用多种配体序贯活化一系列受体而完成。在正常生理性血管生长过程中，如胚胎形成、骨骼生长等，VEGF信号代表重要的限制酶，在病理情况下，可出现VEGF的异常表达，在缺血性疾病中，缺氧可刺激VEGF表达上调，通过对内皮细胞强烈的促有丝分裂作用，促进新生血管形成；VEGF可以增加血管的

5、通透性，尤其是微小血管的通透性，引起血浆蛋白渗漏到细胞外基质，中文摘要在细胞外基质中沉着，为成纤维细胞和血管内皮细胞的迁入提供条件基质，为肿瘤细胞的生长和新生毛细血管网的建立提供营养。以往翼状胬肉被认为是一种结膜组织的变性，近期的研究结果认为，翼状胬肉可能是一种生长过程的紊乱。亦有研究表明，转基因鼠在皮肤上过度表达VEGF，明显影响皮肤的血管新生，使皮肤出现类似牛皮癣样的炎性反应。所以更有必要从以上的不同角度综合进行研究。本文从以下几个方面进行探讨：1．通过对端粒酶的研究，深入了解翼状胬肉的发病机制，为预防治疗翼状胬肉提供新思路。2．通过对VE

6、GF表达的研究，了解翼状胬肉的发生机制，提供降低其复发率的治疗理论依据。3．探讨端粒酶表达与VEGF表达的关系。方法：从本院2009．1—2009．9门诊初发的进行期翼状胬肉手术患中选择标本二十二例，入选标准：男性1l例，女性11例，年龄35．75岁，病程8月至20年，所有病例均无其他结膜、角膜疾病，排除巩膜炎，色素膜炎等有关的疾病，排除肿瘤及免疫系统等引起眼部增生的全身疾病，术后经病理检查确诊是翼状胬肉的。另取年龄和条件相匹配的正常球结膜(2mm×2mm)8侈0作为对照，其中男性5例，女性3例，年龄32．65岁。标本经10％甲醛固定，常规脱水

7、、石蜡包埋，作39m连续切片，分别进行VEGF、PCNA、TERT免疫组织化学染色，并且对hTERT进行原位杂交染色。结果判断：胞浆内有呈棕黄色颗粒反应产物的为阳性细胞。光镜下每例标本切片任取5个视野进行细胞计数，至少计数500个细胞，以阳性细胞占细胞总数的百分比表示阳性表达率。A为阳性细胞数分级：O～<1％=O，1～<10％=1，10～<50％=2，50～<80％=3，80～100％=4。B为阳性细胞显色强度分级：0(阴性)，1(弱阳性)，2(阳性)，3(强阳性)。IHS=A×B统计方法：研究病例组与正常组间均采用染色强度及染色阳性率乘积的I

8、HS评分，成组设计两样本比较的秩和检验，病例组hTERT和VEGF两样本比较的秩和检验。所有分析采用spssl6．0统计软件包，取a=0．05做为检验