抑制吲哚胺2，3双加氧酶活性促进慢性粒细胞白血病源树突状细胞的功能

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1、兰州大学硕士学位论文抑制吲哚胺2，3．双加氧酶活性促进慢性粒细胞白血病源树突状细胞的功能中文摘要一目的树突状细胞(dendriticcell，DC)因其强大的抗原提呈功能和激活抗原特异性CTL(cytotoxicTlymphocytes)反应，成为肿瘤免疫治疗的重要载体。以DC为基础诱导的特异性抗肿瘤免疫治疗也成为肿瘤生物治疗领域的研究热点，白血病细胞来源的DC因携带自身肿瘤抗原在白血病免疫治疗中倍受关注。研究发现白血病来源的DC与正常DC相比，其表面分子表达相似，但抗原提呈功能较弱。吲哚胺2，3-双hn氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，ID

2、O)是色氨酸分解代谢所必需的限速酶，在体内分布比较广泛。由于IDO的活化，使得游离的色氨酸减少以及色氨酸代谢产物的增加，导致细胞周期停滞、T细胞无应答，以及诱导调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcell，Treg)的产生。已证实IDO有免疫负调节作用并参与肿瘤免疫逃逸。随着慢性粒细胞性白血病源树突状细胞(dendriticcellsderivedfromchronicmyeloidleukemia，CML-DCs)的成熟，IDO表达明显上调，因此我们没想能否通过抑制CML-DCs中IDO的活性以增强CML-DCs的免疫刺激功能。二方法采集初治慢性粒

3、细胞性白血病(CML)慢性期患者的骨髓，分离单个核细胞(mononuclearcells，MNCs)，采用人rhGM．CSF和rhlL-4细胞因子组合先将兰州大学硕十学位论文CML-MNCs诱导分化为不成熟DC(imDC)，再加用TNF—a进一步使其成熟(mDC)。RT-PCR检测CML-DCs中的IDO．mRNA的表达情况。流式细胞仪检测CML-DCs免疫表型。在有或无IDO抑制剂1．甲基色氨酸(1-MT)作用下，分别以不成熟CML-DCs(imDC)和成熟CML-DCs(mDC)为刺激细胞，完全缓解期(completeremission，CR)CML患者外周T淋巴

4、细胞为反应细胞建立混合淋巴细胞反应体系，ELISA法检测CML-DCs上清液IL-12水平，M丌法检测CML-DCs刺激自体T淋巴细胞的增殖能力。三结果慢性粒细胞性白血病骨髓单个核细胞经体外扩增后，具有典型的树突状形态特征，经染色体检查证实了其慢粒源性。RT-PCR检测成熟DCs和不成熟DCs中IDOmRNA的表达，显示随着CML-DCs的诱导分化和成熟，IDO．mRNA的表达不断增高；经TNF．a诱导的DCs的免疫表型除CDla外，CD80、CD86、CD83、HLA—DR的表达明显上调(P<0．05)，上述表达不受1-MT的影响。应用1-MT抑制IDO活性后的不成

5、熟DCs和成熟DCs，其分泌IL-12水平均明显增高(尸

6、复发并最终治愈白血病有着深远的理论和实践意义，为白血病生物治疗提供了全新的思路和方法。关键词慢性粒细胞性白血病；吲哚胺2，3．二氧化酶；树突状细胞；1．甲基色氨酸3兰州大学硕士学位论文Inhibitionofindoleamine2,3-dioxygenaseactivitypromotesobjectivefunctionofdendriticcellsderivedfromchronicmyeloidleukemiaABSTRACTDendriticcells(DCs)arethemostpowerfulprofessionantigen—presentingce

7、lls(APCs)invivoandplayacrucialcentralroleintheoutcomeofseveralimmuneresponses．DCshavebeensuccessfullyusedinclinicaltrailstoinducetumor-specificimmunity．AlthoughtheDCsderivedfromleukemiapatientshavethesimilarmorphologyandimmunophenotypewithDCsfromnormalindividuals，theimmunologic