低温保存对白血病源性树突状细胞的影响

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1、低温保存对白血病源性树突状细胞的影响作者：黄友章，沈建良，王立新，向丹，郑培浩，岑坚，宫立众，刘毅，杨平地【摘要】本研究观察低温保存对白血病源性树突状细胞(LDCs)的生物学特性和功能的影响。取急性、慢性髓系白血病骨髓细胞，将其一部分细胞立即检测，一部分细胞立即培养，一部分细胞加入细胞保护剂低温保存一定时间复温后培养。细胞培养时，在细胞培养体系内加入组合细胞因子并培养12天，然后分别检测3组细胞的细胞形态、细胞免疫表型、混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应，并对结果进行相互比较分析。结果表明：　在细胞形态学方面，急性、慢性髓系白血病患者骨髓细胞在不染色或在瑞氏染色下仅见白血病细

2、胞，而未观察到"树突状"细胞，但经组合的细胞因子培养后，均出现了"树突状"形态的细胞，低温保存前、后二者比较，无明显差异；在细胞表面免疫标志表达方面，经组合细胞因子培养的细胞与未培养的细胞相比，细胞表面表达的CD80、CD54、HLADR、CD1a、CD83、CD86明显上调，而CD14表达则明显下调，低温保存前、后的细胞在上述几种细胞表面免疫表达指标方面相比较无明显差异；低温保存后的白血病细胞经培养后，不仅有明显的混合淋巴细胞反应，而且在与T细胞作用后T细胞表面抗原CD8和CD25免疫标记细胞明显增多，明显地表现了CTL杀伤自体白血病细胞的效应。结论：　髓系白血病细胞在组合细胞因子培养条

3、件下，可诱生为LDC；LDC的诱生在生物学特性方面不受低温保存的影响。【关键词】白血病细胞InfluenceofCryopreservationonLeukemicDendriticCellsDerivedfromLeukemiaPatientsAbstractThisstudyedtoinvestigatetheinfluenceofcryopreservationonbiologicalpropertiesandfunctionofleukemicdendriticcells(LDCs)derivedfrompatientsia.Somefreshleukemiccellsmedi

4、ately;somemediately;some.12dayslater,LDCsorphology,immunophenotype,mixedlymphocyticreaction(MLR)andCTLcytotoxicityonautologousleukemiccells.TheresultsshoiccellsobtainedfrompatientsiarevealedtypicalDCmorphologicallybymeansofusingbinationsofcytokinesinculture,butthereleukemiccellsulatingMLRandinduci

5、ngCTLiccellsobviously.Itisconcludedthatleukemiccells,regardlessoffreshorfrozen,caninduceLDCsaftercultureiccells,andmaybeusedtotreatMRDasimmunotherapy.TheinductionandbiologicalpropertiesofLDCsarenotinfluencedbycryopreservation.Keyiccell;dendriticcell;cryopreservation白血病化疗后的复发率高达90％以上，即使造血干细胞移植后也有一

6、定比例的复发，复发原因是因为存在微小残留病（MRD）。针对MRD的治疗，目前有化疗、免疫治疗等手段，其中树突状细胞（DC）介导的过继免疫治疗最具特异性和应用前景［1］，已知白血病细胞在细胞因子作用下可诱导生成DC，这种白血病源性树突状细胞(LDC)既能表达白血病抗原，又具有致敏T淋巴细胞的作用。致敏的T淋巴细胞可特异性杀灭白血病细胞。然而，在白血病初发时，由于白血病细胞多，肿瘤负荷大，免疫功能差等因素的影响，应用LDC治疗疗效差，如果在病人获完全缓解后，其体内白血病细胞已十分稀少，细胞免疫功能等也基本恢复，此时应用DC治疗MRD疗效应该明显。DC虽然可低温保存，但其功能会受到一定损伤［2

7、］，若能在治疗前将白血病细胞先期保存，待白血病取得完全缓解时，复苏白血病细胞并诱生为DC，用自身DC进行过继免疫治疗，临床应用会十分方便，但急性、慢性髓系白血病细胞低温保存后诱生的白血病源性树突状细胞的功能如何？未见报道，本研究试图观察低温保存白血病细胞对白血病源性树突状细胞(LDC)生物学特性和功能方面的影响。白血病细胞来源与分组经临床、血液检查、骨髓细胞形态学、免疫学、遗传学、分子生物学标准确诊的初发髓