河南地区猪圆环病毒血清学调查与orf2基因片段的表达

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1、摘要猪圆环病毒(PorcineoiIc,,oviI'u8，PCV)属于圆环病毒科，是一种无囊膜的二十面体的单链环状DNA病毒。该病毒分为两种基因型，即PCV-I和PCV-2。前者由Tischcx等1974年在PK-15(ArCC￡CL31)细胞中发现，是引起仔猪传染性先天性震颤的主要病原之～，后者是仔猪断奶后多系统衰竭综合征0'MWSl的重要瘸原。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)，对河南省不同地区、年龄和品种猪的1886份血清样本进行了测定，数据统计分析，结果表明PCV-2在猪群中的感染非常普遍；不同年龄及不同品种猪对PCV-2的易感性不同；PCV-2的感染可明显降低猪群对疫苗的免

2、疫应答；河南省34个猪场中32个PCV-2血清抗体呈阳性：经产母猪阳性率57．50％、后备母猪阳性率53．84％、断奶仔猪阳性率53．21％、断奶前仔猪阳性率51．33％；土杂猪IPcV-2血清抗体阳性率52．54％与长白猪51．31％差别不大，但明显高于大约克和杜洛克。根据Genbank发表的PCV-2核苷酸序列，设计并合成两对猪II型圆环病毒(PCV-2)ORF2基因特异性引物，从3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)的死亡仔猪病料中PCR扩增到l株PCV-2ORF2基因，将其毙隆至PMD-19

3、T载体，经测序后，将所测序列与已公布的PCV-2ORF2序列进行同源性比较，并绘制系统发育进化树。结果显示，所测毒株与其他毒株的ORJ2基因核苷酸同源性为88．2％-100％；进化树分析表明分离毒株在进化上存在地域上的相关性。将扩增出的ORF2基因片段克隆到表达载体pET-32a,得到阳性重组表达质粒pET-32F2。将重组质粒pET-32F2转化到表达宿主菌BL21(DE3),经_1．0mmol／LIPTG诱导，成功表达了ORF2基因编码的结构蛋白。表达的蛋白为融合蛋白，分子量38KD。该蛋白的成功表达将为进一步研究其功能和研发相应的诊断技术进行PCV-2抗体的检测奠定良好的基础。

4、关键词t猪圆环病毒；血清流行病学；ORF2基因：原核表达AbstractPorcineCircovirus(PcV)isasmall，nonenveloped,icosahedralmammalianvirusconminingacircularsin【gle-strandedDNAgenome,whichnOWhasbeenassignedtotheCirceviridaefamily．PCV-1wasfirstdescribedin1974byTisher∞apicornavhm-likecontaminantofthepermanclRpigkidneycelllinePK-1

5、5andacceptedtobeanonpathogenicvirus．Howevcr,PCV-2hasbeenassociatedw{lhpostweaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWs)．1886bloodserumsamplescollectedfromHenanProvincew口etestedwithPCV-2ELISAKit．11”serologydataofdifferentregion、differentageanddifferentvarietyswinewasanalysised．Itwasindicatedthatthei

6、nfectionofPCV-2existedwidelyinswinefarmsillHeⅢmnprovince．AgeandBreedaffectedtheswineresistancetoPCV2．TheillfeclionofPCV2candistinctlyreducetheswine'simmtmeresponsetovaccine．TwolⅪdrsofspecificprimerswasdesignedaccordingtothepublishedgenomesoqu如o∞ofPCV-2toamplifytheORF2g肌eofPcv二2fiomthreesamplesw

7、itllclinicalsigns0fPMWSbyPCIL1kPCRproductWaSclonedintopMD-1STvectorand8equenced．Aftercomparisonofthe8equance谢thwhlohofotherPCVstrainsinOenSank,phylogenefictreeanalysisWaSperformed011thePCVstrains．ItwasshowedthatthexeWflS88．2％一100％